在液体培养基中形成孢子

一、简介

一种新的酵母菌株的构建方案分为几个不同的步骤:①二倍体的构建,在这里两个单倍体进行交配;②孢子形成,在这里二倍体细胞被诱导形成孢子;③四分体孢子的制备,在这里囊壁被从四分体孢子上除去;④四分体孢子的分离,在这里来自一个单独的四分体 抱子的四个单倍体抱子中的每一个都被明确地安置在一块平板上,并继续生长用作以后的研究。

二、操作方法

在液体培养基中形成孢子

三、原理

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四、材料与仪器

培养基五、步骤

1)在合适的培养容器中,加入YPD培养基培养,待形成孢子的二倍体细胞生长至 OD600为 2.5〜3.0 (约为 8×107细胞/mL)。

2)转移1 mL培养液至一支无菌15 mL聚丙烯试管中,1200 g离心5 min。

3)倒去上清,用5 mL无菌水重悬细胞,涡旋振荡使细胞充分悬浮,再按步骤2离心。

4)倒去上清,细胞用1 mL添加了特定二倍体细胞所需营养成分的孢子形成液体培养基悬浮。

5)于30℃,350 r/min以上转速培养2〜3天,在显微镜下检査孢子的形成。

如果酵母菌株难以诱导形成孢子,用YPA培养基预培养细胞。用乙酸作碳源时,酵母菌需要呼吸,而呼吸作用是孢子形成所必需的。

六、注意事项

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七、常见问题

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