1)当细胞汇合度达到 85%以上时，可进行传代。
2)在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，收集瓶内的培养基；
3)向培养瓶内加入 3ml无菌的 1×PBS 后，水平放置培养瓶，使 PBS 能够浸润到培养瓶底面上所有的面积，吸弃 PBS；
4)向瓶内加入消化液 1ml，浸润底面后放入 37℃ CO2培养箱中孵育 1~2min；
5)孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，若全部消化下来则直接向培养瓶内加入
注：如还有部分细胞未消化下来，可采用分步消化：
2ml 含 10%FBS 的培养基（这里的培养基可以用DMEM就行或者其他的基础培养基）中，将悬液吸入 15ml 离心管；
① 准备一个无菌的 15ml 离心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培养基；
②将消化下来的细胞吸入①中的离心管内中和（避免吹打）
③ 向之前消化的培养瓶中加入 1ml 胰酶继续消化 2min 左右，轻拍培养瓶，95%左右细胞脱落后加入2ml 含 10%FBS 的完全培养基中和，中和后的细胞悬液移入①中的离心管内
1)1000rpm 离心 5min；
2)准备两个新的 T-25培养瓶，各加入 4ml 完全培养基。
3)离心完成后，弃上清，用 2ml完全培养基重悬离心细胞，将重悬后的细胞转入2个T-25培养瓶，每个培养瓶各1ml；
4)水平放置培养瓶，震荡混匀后，将培养瓶置于 37℃，5%CO2培养箱中静置培养。
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