什么是RIP检测?

核酸和蛋白质是组成生命的主要物质,研究细胞内RNA与蛋白结合情况,可以了解转录后调控网络的动态过程,帮助我们发现的miRNA的的的的的调节靶点,RIP检测实验是应用于蛋白与RNA互作关系的重要参考。

RIP技术(RNA Binding Protein ImmunoprecipitationRNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术。运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行分析;即用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白,防止非特异性的RNA的结合,免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来,结合的RNA序列通过microarrayRIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物。

RIP检测实验原理:

1.用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。

2.防止非特异性的RNA的结合。

3.免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。

4.结合的RNA序列通过microarrayRIP-Chi),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。

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