神经母细胞瘤造模方法（一）——皮下荷瘤

神经母细胞瘤（Neuroblastoma, NB）是小儿最常见的恶性实体肿瘤之一,具有恶性程度高、侵袭力强、早期转移率高、晚期病例多、治疗效果差的特点。

在先天性畸形和感染性疾病诊治水平已明显提高的当今社会,神经母细胞瘤仍然是严重威胁儿童生命健康的一个常见死亡原因。所以,如何提高神经母细胞瘤的临床研究和诊治水平并探讨研究肿瘤的预后,仍然是国内外学者普遍关注的一个问题。研究该病时常采用的小鼠模型有异种原位移植模型和异种皮下移植模型。本文主要介绍异种皮下移植模型。

实验用品

耳号、耳号钳、小鼠体重秤、剃毛器、1mL无菌注射器。

动物准备

造模动物主要包括重度免疫缺陷的NCG小鼠和裸鼠。本文以NCG小鼠为例。

选取8周龄左右、体格健壮、四肢有力、被毛顺滑光亮无外伤、体重在20g左右（上下浮动不超过1g）的NCG小鼠。

随机分组，每组6只，并打上耳号。

实验方法

1.制备细胞系：将人源神经母细胞瘤BE2C-dsred细胞进行体外培养，经传代、纯化，制备成细胞系。

2.扩大培养细胞：注意定期更换培养液，保证营养供应，使细胞处于最佳状态。3.制备细胞悬液：将对数生长期的细胞用酶消化法制备成单细胞悬液，离心浓缩，计数板计数活细胞，将浓度调整为1×10⁶个/100μL，低温保存。4.小鼠备皮：抓取保定小鼠，使用小动物剃毛器将小鼠右侧背部包括大腿的位置毛发剃除，碘酒消毒皮肤。5.皮下移植细胞：1） 1mL无菌注射器吸取细胞悬液备用。2）在小鼠右侧大腿根部位置，将无菌注射器针头与小鼠皮肤平行方向扎入小鼠皮下。针头稍挑起，可见小鼠表皮明显被挑起，即证明已扎入皮下而非肌肉层，位置正确。3）针头在皮下进针约1cm后，将100μL单细胞悬液注射入皮下，此时可见明显突起。4）慢慢退针，将小鼠放回笼盒饲养。