卵母细胞冷冻保存技术快速冷冻法

简介

卵母细胞冷冻保存技术快速冷冻法,是卵母细胞冷冻保存技术慢速冷冻法的改进。

材料与仪器

器材:

0.25 mL 细管、冷冻仪、液氮罐。

试剂:

① 甘油 ;

② PBS ;

③ PBSS(含 20% NCS 的 PBS)。

步骤

卵母细胞冷冻保存技术快速冷冻法的基本过程可分为如下几步:

A. 冷冻保护剂平衡处理卵母细胞后开始以 1 ℃/min 的速度降温;

B. - 5~- 7 ℃ 植冰;

C. 以 0.1~1.0 ℃/min 的速度降温到 - 80 ℃ 或 - 30~- 40 ℃,投入液氮。

注意事项

降温到 - 30~- 40 ℃ 时投入液氮在牛、人和小鼠的卵母细胞应用较多、效果较好。而降温至 - 80 ℃ 投入液氮的报道很少、效果也不理想,现已基本不用。

解冻一般在室温或 37 ℃ 进行。

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