EpigenTek:RNA甲基化研究

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我们提供最全面的RNA甲基化研究产品,涵盖实验流程的每一步,从上游到下游。借助EpigenTek的RNA甲基化产品系列,拓展您对RNA的理解 

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什么是RNA甲基化?

RNA甲基化是一种RNA的转录后修饰,它通过改变基因调控而不改变结构基因序列来发挥作用。这种修饰在包括病毒在内的众多生物物种中都有发现,并与重要的生物学过程密切相关。与DNA甲基化类似,RNA甲基化是可逆的,在生命中广泛存在,主要涉及甲基基团的添加。然而,RNA甲基化在不同类型的RNA中的分布并不均匀。RNA甲基化发生在tRNA、rRNA、mRNA、tmRNA、snRNA、snoRNA、miRNA和病毒RNA中。mRNA上较为熟悉的两种修饰包括N6-甲基腺苷(m6A)和5-甲基胞嘧啶(5mC)。 

在所有化学上不同的RNA修饰中,N6-甲基腺苷(m6A)是最常见的。它涉及腺苷碱基在氮-6位的甲基化。通常被称为“第五RNA碱基”,m6A占真核生物中所有RNA甲基化的80%以上。特别是,这种RNA修饰被认为对mRNA调控很重要,因为m6A在3'非翻译区(3'UTR)富集。此外,它还与多种癌症相关,包括白血病、乳腺癌和前列腺癌。  

另一种在各种RNA分子中发现的丰富的表观遗传标记是5-甲基胞嘧啶(5mC),它涉及在5-碳环上添加甲基基团。据报道,5mC存在于多种不同的RNA类型中,包括rRNA、tRNA、eRNA以及mRNA和各种非编码RNA。检测RNA中5mC修饰的最理想方法是通过亚硫酸氢盐转化后进行高通量测序。  


哪种RNA甲基化工具适合您的实验?

RNA修饰,尤其是RNA甲基化的重要性是显而易见的。然而,RNA甲基化研究领域仍处于起步阶段。许多已建立的检测方法严重依赖于抗体依赖的转录组范围技术,其中大多数集中在RNA中m6A的发生上,因为其生物学作用已被广泛研究。5mC RNA检测技术,包括亚硫酸氢盐测序,也引起了关注,因为5mC RNA与多种细胞过程和肿瘤发生有关。新的生化方法与高通量测序相结合,使得研究整个转录组以及绘制单个修饰成为可能,揭示RNA修饰酶或蛋白质结合因子的真正功能。 

在开始您的RNA甲基化研究项目之前,我们建议回顾与您计划实验相关的任何可用文献。如果其他研究人员进行了类似的工作,您应该利用他们的信息,并将其作为您研究的基础,仔细审查以避免潜在的障碍。 

如果您希望分析RNA中m6A或5mC修饰的全局水平,我们建议从对样本中甲基化状态的简单预筛查开始。这些方法可通过我们的热门产品——m6A RNA甲基化定量试剂盒和5-mC RNA甲基化ELISA试剂盒实现。对于直接靶向m6A或5mC,我们建议使用我们的m6A富集试剂盒或亚硫酸氢盐转化试剂盒。 

访问我们的RNA甲基化资源中心,获取更多关于RNA甲基化的有用信息。为了方便您了解我们的产品,我们还详细介绍了RNA甲基化产品的优势。对于涉及病毒和宿主RNA修饰的研究,请访问我们的表观遗传病毒RNA修饰工作流程页面。  

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RNA甲基化研究步骤详细信息

 

1. RNA分离提取

RNA分离是任何RNA甲基化研究的关键第一步。我们的RNA制备试剂盒能够在短时间内高效分离来自组织、培养细胞和无细胞液体样本(特别是唾液和鼻咽拭子)的总RNA。纯化的RNA可用于多种常规应用,如RT-PCR、cDNA合成、Northern blot、差异显示、引物延伸和mRNA选择。

编号 名称 描述
P-9105 EpiQuik总RNA分离快速试剂盒 使用柱式方法在约30分钟内从细胞或组织中分离总RNA
P-9106 EpiQuik磁珠快速RNA分离试剂盒 使用磁珠方法在约30分钟内从细胞或组织中分离总RNA

查看更多提取试剂盒:点击链接 


2. 整体m6A和5mC RNA定量

EpigenTek的m6A和5mC RNA甲基化试剂盒使研究人员能够轻松确定RNA甲基化如何影响他们的研究项目。我们的试剂盒可以直接定量N6-甲基腺苷(m6A)或测量任何物种(包括哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒)分离的总RNA中的5-mC。

编号 名称 描述 文章数量
P-9005 EpiQuik m6A RNA甲基化定量试剂盒(比色法) 在不到4小时内比色法定量RNA中的N6-甲基腺苷(m6A/6mA) 680+
P-9008 EpiQuik m6A RNA甲基化定量试剂盒(荧光法) 在不到4小时内荧光法定量RNA中的N6-甲基腺苷(m6A/6mA) 12
P-9015 MethylFlash尿液m6A定量试剂盒 通过类似ELISA的方法在4小时内定量尿液中的N6-甲基腺苷 新产品
P-9009 MethylFlash 5-mC RNA甲基化ELISA简易试剂盒 在2小时40分钟内定量RNA中的5-mC 12

 

3. RNA亚硫酸氢盐转化和cDNA合成

亚硫酸氢盐处理技术,也称为亚硫酸氢盐转化,是准备RNA进行特异性甲基化分析的理想方法。该过程将胞嘧啶转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,可通过高通量测序轻松区分。亚硫酸氢盐转化后的RNA还可用于生成cDNA,用于分析甲基化状态的各种下游应用。

编号 名称 描述
P-9003 Methylamp RNA亚硫酸氢盐转化试剂盒 用于基于化学的RNA亚硫酸氢盐处理,以分析甲基化胞嘧啶
P-9004 EpiNext高保真cDNA合成试剂盒 专门使用亚硫酸氢盐转化的RNA和富集的RNA片段合成DNA副本
P-9007 EpiNext 5-mC RNA亚硫酸氢盐测序简易试剂盒 用于简化RNA亚硫酸氢盐转化和NGS文库准备,用于5-甲基胞嘧啶RNA测序

 

4. NGS文库准备

文库准备是下一代测序(NGS)的关键步骤。我们为NGS提供了许多经济实惠的解决方案,包括方便地从难以处理的样本中构建高质量的RNA/DNA文库,可用于各种基于Illumina的平台。

编号 名称 描述
P-1053 EpiNext高灵敏度DNA文库准备试剂盒 从极少量样本中准备DNA文库,用于下一代测序应用
P-1060 EpiNext NGS条形码(Index)套装-12 用于构建用于Illumina平台(包括GAIIx、HiSeq、MiSeq和NextSeq)的多重RNA/DNA文库

 

5. MeRIP和m6A-Seq分析

使用我们的CUT&RUN RNA m6A富集试剂盒获得m6A RNA的高分辨率图谱。凭借独特的核酸酶混合物,这些试剂盒仅分离抗体结合位置的RNA片段,并同时切割/去除目标区域下方的RNA序列片段。我们的试剂盒可以从低输入量的RNA中富集含有m6A修饰的RNA片段,非特异性背景水平极低。CUT&RUN RNA m6A-Seq试剂盒还包括文库准备步骤,作为额外优势。

编号 名称 描述
P-9018 EpiQuik CUT&RUN m6A RNA富集试剂盒 基于CUT&RUN的MeRIP,提高特异性和信号
P-9016 EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Seq试剂盒 基于CUT&RUN的MeRIP和NGS文库准备一体化试剂盒

 

6. 研究RNA甲基化的抗体

N6-甲基腺苷(m6A)是真核生物中RNA分子中最常见和最丰富的修饰之一。m6A的化学性质使其难以区分,因此分析这种修饰的方法高度依赖于抗m6A抗体的质量。我们的多克隆和单克隆m6A抗体可用于特异性检测RNA中的m6A。它们经过严格测试,保证在各自的应用中有效。

编号 名称 描述
A-1801 N6-甲基腺苷(m6A)多克隆抗体 高特异性针对N6-甲基腺苷(m6A)的多克隆抗体
A-1802 N6-甲基腺苷(m6A)单克隆抗体 [2H6] 高特异性针对N6-甲基腺苷(m6A)的单克隆抗体

  

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