单克隆抗体技术

简介

单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb），简称单抗，是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体／多株抗体-由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。单克隆抗体由可以制造这种抗体的免疫细胞与瘤细胞融合后的细胞产生的，这种融合细胞既具有瘤细胞不断分裂的能力，又具有免疫细胞能产生抗体的能力。融合后的杂交瘤细胞可以产生大量相同的抗体。当其应用于医疗中时，在识别抗原中显示的微小变化（如果有的话）有助于减小副作用。

原理

杂交瘤单克隆抗体制备技术的基本原理是利用聚乙二醇作为细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细胞与具有不断繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞在体外进行融合，在 HAT 选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经过反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养 (克隆化)，最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能不断繁殖的杂交瘤细胞系，将这种细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，在其产生的腹水中即可得到高效价的单克隆抗体。

材料与仪器

器材：

①离心机

②培养箱

③注射器

④细菌滤器

试剂：

①材料：小鼠骨髓瘤细胞

②聚乙二醇

③培养基

④抗生素

步骤

单克隆抗体试验的基本过程可分为如下几步：

（一）单克隆抗体制备过程

淋巴细胞杂交瘤技术的主要步骤包括：动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选与单抗检测、杂交瘤细胞的克隆化、冻存、单抗的鉴定等，图 4-13 概括了淋巴细胞杂交瘤技术研制单抗的主要过程。

（二）对 McAb 的鉴定

1．抗体特异性的鉴定除用免疫原（抗原）进行抗体的检测外，还应该用与其抗原成分相关的其他抗原进行交叉试验，方法可用 ELISA、IFA 法。例如：①制备抗黑色素瘤细胞的 McAb，除用黑色素瘤细胞反应外，还应该用其他脏器的肿瘤细胞和正常细胞进行交叉反应，以便挑选肿瘤特异性或肿瘤相关抗原的单克隆抗体；②制备抗重组的细胞因子的单克隆抗体，应首先考虑是否与表达菌株的蛋白有交叉反应，其次是与其他细胞因子间有无交叉反应。

2．McAb 的 Ig 类与亚类的鉴定一般在用酶标或荧光素标记的第二抗体进行筛选时已经基本确定了抗体的 Ig 类型。如果用的是酶标或荧光素标记的兔抗鼠 IgG 或 IgM，则检测出来的抗体一般是 IgG 类或 IgM 类。至于亚类则需要用标准抗亚类血清系统作双扩或夹心 ELISA 来确定。在作双扩试验时，如加入适量的 PEG（3％），更有利于沉淀线的形成。

3．McAb 中和活性的鉴定用动物或细胞的保护实验来确定 McAb 的生物学活性。例如，如果确定抗病毒 McAb 的中和活性，则可用抗体和病毒同时接种于易感的动物或敏感的细胞，来观察动物或细胞是否得到抗体的保护。

4．McAb 识别抗原表位的鉴定用竞争结合试验，测相加指数的方法，测定 McAb 所识别抗原位点，来确定 McAb 的识别的表位是否相同。

5．McAb 亲合力的鉴定用 ELISA 或 RIA 竞争结合试验来确定 McAb 与相应抗原结合的亲合力。