材料
- 装在冷冻培养瓶中的细胞： BS-C-1 、CV-1 、HuTK- 143B 或BHK-21 细胞
- 70% (VIV) 乙醇
- 起始和维持培养基（表1) ， 37°C
- PBS （可选）
- 胰蛋白酶／EDTA： 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶／0. 02% (m/V) EDTA, 37℃
- 25 cm2和150 cm2组织培养瓶
-
湿润的、37°C 、5% CO2培养箱
表1 用于细胞系生长和维持的培养基a
| 细胞系 |
维持培养基 |
起始培养基 |
| BHK-21 |
完全MEM-10 |
完全MEM-20 |
| BS-C-1 |
完全MEM-10 |
完全MEM-20 |
| CEF |
完全MEM-10 |
完全MEM-10 |
| CV-I |
完全的DMEM-10 |
完全的DMEM-20 |
| HelaS3 |
转瓶完全培养基－5 |
完全MEM-10 |
| HuTK- 143B |
完全MEM-10/BrdU |
完全MEM-20/BrdU |
在37°C 水浴中融化一支冷冻细胞的培养瓶，用70％乙醇将瓶口消毒，用移液管将细胞移入一个25 cm2的组织培养瓶（装有5 ml 起始培养基）中，转动培养瓶，使细胞均匀地分布，放入湿润的5% CO2培养箱中37°C 培养过夜。
吸出起始培养基，换成维持培养基，将细胞放回培养箱内，每天检查细胞的汇合度。
当细胞长成汇合的单层时，吸出培养基，用PBS 或胰蛋白酶／EDTA 洗涤一次细胞，以除去残留的血清．
用足量的37℃胰蛋白酶／EDTA 刚好覆盖细胞单层（如一个25 cm2的组织培养瓶用 0.3 ml) ，静置30~40 s, 摇动培养瓶，使细胞完全分开。
加入1. 4 ml 维持培养基，用吸管来回吹打细胞悬液几次，以分散细胞团块（这些细胞可用于传代）。
取0.5 ml 细胞悬液，将其加到一个新的150 cm2 组织培养瓶（含有30 ml 维持培养基）中，转动培养瓶，使细胞均匀地分布，放入37℃ 的CO2培养箱中，直到细胞汇合（约1 周），大约每间隔一周按约1: 20 的比例分到维持培养基中来维持细胞。
内容来源：生物资料网，如果侵权麻烦联系网站工作人员删除！
