cck8法检测细胞增殖详细操作步骤

以cck8法检测细胞的增殖能力为例:

一、准备cck8检测细胞增殖实验器材

实验仪器:CO2恒温培养箱、光学倒置显微镜、超净工作台、血球计数板

实验试剂与耗材:DMEM/F12培养基、胎牛血清、胰酶、6cm细胞培养皿、抗生素、96孔细胞培养板、CCK-8

二、cck8检测操作步骤

1、细胞复苏

(1)将ddH2O预温至37℃

(2)戴上手套和口罩帽子,从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管,立即投入37℃ddH2O中,轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。

(3)完全溶解后,75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后带进超净台。

(4)在超净台中,在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基,打开冻存管,将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中,常温1000 rpm离心3分钟,吸除上层的培养液。

(5)1mL培养基重悬细胞沉淀,轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中,补足培养基至5 mL,置于37℃5%CO2培养箱培养。

(6)48小时后换液,细胞融合接近80%时即可传代。

2、细胞增殖待测细胞预处理

细胞放在专用的培养基内,在适宜待测细胞温度湿度的培养箱中培养。

3、CCK-8检测实验

(1)取生长状态良好的各组细胞用0.25%胰酶消化后,细胞计数。

(2)将细胞种到96孔板中,密度为7000个细胞/孔。

(3)各组细胞在检测时间点时,每孔加1/10体积CCK-8,在37℃5CO2培养箱中培养2小时。

(4)选择450 nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

(5)通过Gradpad软件计算并绘制细胞增殖曲线图。

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