【Biotium力荐】TrueBlack 好用的脂褐素自发荧光淬灭剂

脂褐质是一种由高度自发荧光的氧化蛋白质和脂质颗粒组成的结构，这些颗粒会在老化细胞的溶酶体中积累。脂褐质颗粒在荧光显微镜检查的各个通道中都会发出明亮的荧光，并且随着年龄的增长在不同的细胞和组织类型中积累。因此，在成年人体组织或老年动物组织中，如果不采用相应的方法来抑制或遮蔽脂褐质的荧光，实际上是不可能对特定的免疫荧光信号进行成像的。

今天给大家带来艾美捷代理品牌荧光领域领导者Biotium研发的TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher(货号：23007)，可在用于免疫荧光染色的组织切片中淬灭脂褐素自发荧光。

TrueBlack的特点：

• 可消除脂褐质自发荧光
• 减少来自非脂褐质来源的自发荧光
• 与Sudan Black B不同，不会导致高背景
• 可在免疫荧光染色之前或之后使用
• 为人类和老年动物组织的荧光成像扫清了道路

TrueBlack®淬灭脂褐质背景荧光效果比Sudan Black B更好

传统上，Sudan Black B已被用于在免疫荧光染色后通过用染料孵育组织切片来淬灭脂褐素自发荧光。然而，虽然它掩盖了脂褐质的自发荧光，但Sudan Black B还在红色和远红色通道中引入了均匀的非特异性背景荧光（图1），从而限制了这些波长中荧光染料的使用。目前Biotium开发了TrueBlack® 作为Sudan Black B 的优越替代品。TrueBlack® 可淬灭脂褐质荧光，而红色/远红色背景荧光的增加要少得多（图1）。TrueBlack®处理可以在免疫染色之前或之后进行。它快速、简单，对荧光抗体或核复染的信号影响最小，从而保持免疫染色的信噪比（图2-3）。

图1. 甲醇固定成人脑切片中的脂褐质自发荧光。在未经处理的组织（第一行）中，脂褐质以荧光颗粒的形式出现，在所有荧光通道中都发出荧光。苏丹黑 B（第二行）掩盖了脂褐质自发荧光，但在红色和远红色通道中引入了背景。TrueBlack®（第三行）封闭了脂褐质，荧光背景增加最小。根据产品Protocol，甲醇固定的成人大脑皮层冷冻切片未经处理或用 70%乙醇中的0.1% Sudan Black B或1X TrueBlack® 染色。样品在蔡司LSM 700共聚焦显微镜的 FITC(绿色)、Cy®3（红色）和 Cy®5（远红色）通道中以相同的增益设置成像。

TrueBlack® 处理可以在免疫荧光染色之前或之后进行:

图2. 免疫荧光染色前使用 TrueBlack® 预处理淬灭脂褐质自发荧光。甲醛固定的人皮层冷冻切片未经处理 (A) 或用 TrueBlack® (B) 处理，然后用 CF®488A 抗 NeuN 抗体偶联物（绿色）和 DAPI（蓝色）染色。在蔡司 LSM700 共聚焦显微镜上的所有通道中对切片进行成像。A. 脂褐质在所有通道中都发出明亮的荧光，在未经处理的组织的合并图像中显示为白点（红色箭头）。B. TrueBlack® 预处理消除了脂褐质自发荧光，对特定染色的影响可以忽略不计。

图3. 免疫荧光染色后使用 TrueBlack®后处理淬灭脂褐质自发荧光。人大脑皮层的甲醇固定冷冻切片先用兔抗GFAP染色，然后用 CF®640R 山羊抗兔（货号: 20176）和DAPI（货号: 40009）染色。切片未经处理或用TrueBlack®处理，然后安装在 EverBrite 封固剂中（货号: 23001）。未处理的切片（左）除了GFAP免疫荧光（胶质突起，品红色）和DAPI染色(细胞核，蓝色)外，还显示出脂褐质自发荧光(白色箭头)。TrueBlack®（右）消除了脂褐质荧光，同时为远红通道（品红色）和核复染（蓝色）中的 GFAP 免疫染色保持良好的信噪比。

TrueBlack®可以减少脂褐质以外来源的自发荧光

TrueBlack® 还可以减少来自其他来源的自发荧光，例如胶原蛋白、弹性蛋白、红细胞和一般背景荧光。它在淬灭这些自发荧光源方面不如对脂褐质有效，但它可以改善人类和非人类组织类型的背景（图4-5）。TrueBlack®还被用于淬灭聚碳酸酯滤光片上的背景荧光，这些滤光片常被用作成像细胞计数的细胞支持物。

图4. TrueBlack® 可减少FITC、Cy®3和Cy®5通道中人肾切片中的非脂褐质自发荧光。人肾冷冻切片在冰冷的甲醇中固定，细胞核用DAPI（蓝色）染色。自发荧光在Zeiss LSM 700 共聚焦显微镜上在所有通道中成像，两个样品的成像设置相同。底部：TrueBlack®处理。

图5. TrueBlack®可减少大鼠肾脏组织切片中 FITC 通道中的非脂褐质自发荧光。将大鼠肾冷冻切片固定在甲醛中，未经处理 (A) 或用TrueBlack® (B)处理。细胞核用DAPI（蓝色）染色。FITC通道（绿色）中的自发荧光在Zeiss LSM700 共聚焦显微镜上对每个样品使用相同的成像设置进行成像。

TrueBlack® Plus：一种独特的脂褐质淬灭剂，远红背景低于原版 TrueBlack®

Biotium 还开发了TrueBlack® Plus（货号：23014），这是一种下一代脂褐素猝灭剂，其远红背景比原来的 TrueBlack®（货号：23007）更低。TrueBlack® Plus 也是唯一一种可用于水性缓冲液而非70% EtOH的脂褐素淬灭剂，可延长厚组织样品的孵育时间而不会收缩。

用于WB和免疫荧光（IF）的背景淬灭剂：

处理专门用于免疫组化中脂褐素淬灭剂TrueBlack® ，我们还提供用于清除蛋白质印迹（WB）背景的TrueBlack® WB Blocking Buffer Kit （货号：23013），以及用于阻断免疫荧光（IF）非特异性染色的TrueBlack® IF Background Suppressor System (Permeabilizing) （23012）。

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Biotium公司是一家在荧光技术领域独树一帜的生物技术公司，公司位于美国加利福尼亚的BAY AREA------世界上首要的生物科技中心。该公司一直致力于开发和生产用于生物医学研究的荧光指示剂及其他特殊生化产品。其产品被广泛应用于细胞生 物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液流动检测及大规模药物筛选等众多领域。Biotium公司专利产品众多，包括已经被广泛使用的实时PCR定量荧光染料EvaGreen、具有划时代意义的凝胶核酸染料Gel Red和GelGreen，以及最新推出的Cheetah Taq热启动酶和CF系列蛋白质标记染料等。

目前，Biotium已将其许多专利技术授权给一些主要的国际生物技术公司，包括安捷伦、BD生物科学、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。   宝天生物科技(BTProbes)由美国知名荧光试剂企业Biotium公司于2007年在华成立，是一家专注于生物荧光试剂研发的高科技企业，是多家欧美企业长期供货商，产品被广泛应用于生命科学各个领域。目前宝天可提供超过100款热卖的荧光蛋白(PE, APC)，其他荧光原料（FITC），用于PCR荧光原料（5-FAM，6-TAMRA）等。

作为Biotium在中国的区域总代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供最全面的Biotium的产品。