天然或变性泛素？单聚或多聚泛素？怎样选择
上次跟大家谈到《如何得到可靠的泛素化数据》，今天继续泛素话题，一起了解下泛素化抗体。
图1：不同类型的泛素化
我们都知道，抗体与许多问题相关联。在研究中，选择合适的抗体至关重要！对于泛素抗体的选择，我们需要注意哪些呢？
天然或变性泛素？
如果购买的抗体是免疫天然泛素蛋白获得的，那么需要确保蛋白样本不会在测定过程中变性，否则会破坏信号。另一方面，泛素是难以变性的小球状蛋白。如果它在SDS-PAGE步骤中没有足够变性，那么能识别变性泛素蛋白的抗体可能不会识别它。
如果你正在寻找一种变性蛋白，你可以在一抗孵育之前，通过对PVDF膜进行变性处理，增加WB信号强度。这种方法听起来似乎不靠谱，但确实是行得通的。具体操作如下：
- 将印迹在沸水中孵育15-30分钟；
2. 20mM Tris-HCl，pH7.5，5mM β-巯基乙醇和6M盐酸胍溶液中4℃孵育30分钟。
单聚或多聚泛素？
大多数泛素抗体可以结合单泛素链和多泛素链。能特异性识别多聚泛素链的抗体已经问世，但是似乎不能均等地识别不同的泛素链。一项研究表明，来自Dako的抗Ub抗体不识别多泛素链中的M1链及K48和K63链，而来自Cell Signaling Technology的抗Ub抗体几乎不能识别M1链。显然，如果目标蛋白上的泛素链较少被识别，那么所得到的信号就会减少。
如果你想检查特定的多聚泛素链，很多已开发的抗体都能满足你的要求。抗K6，K11，K33，K48和K63都可以买到现货，似乎已经得到相当不错的评论。 抗M1，K27和K29的抗体目前还不存在，你或许会成为开发此类抗体的第一人？
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| 产品名称及描述 | 货号 | 产品说明 |
| Ubiquitin monoclonal antibody, clone VU-1 | VU101 | 详情 |
VU-1是一种单克隆抗体，已被证明在Western印迹中识别游离泛素，K48-，K63-，K11-和线性链。VU-1是用于免疫染色应用的优异抗体，其产生稳定的泛素蛋白检测并具有低背景和检测亚细胞泛素定位的能力。更多详情欢迎查看：你不可能遇上比我更好的泛素（Ubiquitin, Ub）抗体-克隆号VU-1
如果你找不到合适的抗体或先前使用的抗体效果不理想，那么你可以使用特定的泛素结合域（ubiquitin binding domains）识别你感兴趣的泛素化蛋白。ubiquitin binding domains 可固定用于下拉或用作探针。详见：Optimising methods for the preservation, capture and identification of ubiquitin chains and ubiquitylated proteins by immunoblotting.（若不能打开此链接，请留言索要原始文章）
我们针对泛素研究做了简要的整理，涉及到泛素通路过程中的各色产品，包括重组泛素，E1活化酶，E2耦合酶，E3连接酶，去泛素化酶等。还有如何有效分离和富集K63-多聚泛素？什么是去泛素化酶和泛素样异肽酶抑制剂：PR-619等做了详细介绍，欢迎大家查看：泛素研究
