1.如何有效设计引物（1）使用Oligo或Primer设计引物，在保守区内设计，长度一般在18-27bp，上下游引物Tm值最好是60-75℃，GC含量=40%-60...
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western-blot化学发光时，出现非特异条带，该怎么办？
出现杂带或非特异条带的原因可能有以下几个方面：1. 蛋白上样量过大。可降低蛋白上样量。2. 一抗是多克隆抗体，或一抗、二抗浓度太高。可更换成单克隆抗体，或降低抗体浓...
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PCR 标记DNA
PCR 是通过热稳定酶，在模板、dNTPs 和一组与片段3′ 序列互补的引物存在下，对插入物进行次序扩增(Saiki et al. 1988) 。PCR 技术提供的...
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Western Blot化学发光(ECL)淬灭的原因？
做Western Blot发光实验经常有“淬灭”的情况发生，经常有朋友反映，加发光试剂后立刻可以看到很明显的亮光，可亮光很快就消逝了，压完片后，条带却很弱，甚至什么...
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电穿孔和电融合技术原理及流程
[实验原理]当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括DNA、RNA、蛋白质、药...
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色谱法分离蛋白质
色谱与DNA 和RNA 一样，蛋白质可以进行常规的分离，或者用色谱法来分离。主要用的色谱法是凝胶过滤、离子交换层析和亲和层析。1. 凝胶过滤，基于分子的大小对物质进...
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离心的种类和原理
离心方法主要有两种：制备型（用来分离某些颗粒）和分析型（用来了解分离颗粒的物理性质）。分子或细胞生物学实验室中所作的决大多数离心机属于制备型离心机，而多数常规制备型...
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导致western Blot发光（ECL）“背景高”的原因有哪些？
Western Blot发光经常有“背景太高”问题，导致“背景高”的原因有很多，主要有以下几个方面：1. 抗体浓度过高，洗涤不充分，可以造成抗体在膜上的非特异结合，...
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western-blot实验常见问题及解决方案（enlight）
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western-blot化学发光（ECL）出现高背景是什么原因？
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现，要弄清楚“背景太高”的原因，先要知道“背景”是什么，“背景”也是发光，影响发光的因素就会影响背景。 ...
