磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC），EC=4.1.1.31，属于一个羧酸裂解酶家族，它催化将二氧化碳添加到磷酸烯醇式乙酸盐（PEP）中形成草酰乙酸盐。备选名称：PEPCase 1、PEPCase 3、PEPC 1、PEPC 3。
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| 磷酸烯醇丙酮酸羧化酶 | AS09-458 | 查看 |
磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基本参数：
- 免疫原：KLH缀合的合成肽高度保守的PEPC1和来自不同植物物种的序列，包括拟南芥Q9MAH0、At1g53310（PEPC1）、Q84VW9、At3g14940（PEPC3）。被选择来引发该抗体的肽在该酶的细菌类型NP_177043.2（PEPC4）中也是完全保守的。对于玉米来说，肽以PEP1和PEP4异构体的形式存在。
- 宿主：兔子
- 克隆性：多克隆
- 纯度：在pH 7.4的PBS中的免疫原亲和纯化血清。
- 格式化：冻干
- 数量：50µg
- 重组：为重组添加50µl无菌水
- 储存：在-20°C条件下冷冻干燥/复原储存；一旦复原，就制作等分试样，以避免重复的冻融循环。请记得在打开管子之前先短暂旋转管子，以避免材料粘附在管子的盖子或侧面可能造成的任何损失。请不要重复使用此初级抗体溶液。在蓝细菌样本的情况下，第二次孵育时将没有信号。
- 测试应用：免疫定位（IL）、蛋白质印迹（WB）
- 推荐稀释度：1:500（IL），1/1000-：10000（WB）
磷酸烯醇丙酮酸羧化酶应用示例：
在4-12%NuPage（Invitrogen）LDS-PAGE上分离来自（1）用蛋白质提取缓冲液提取的拟南芥叶、PEB（AS08 300）、（2）用PEB提取的菠菜总细胞、（3）用PEB提取的大麦总细胞和（4）用PE布提取的玉米总细胞的5µg总蛋白，并用PVDF印迹1h。在室温下，在搅拌下，在20mM Tris、137mM氯化钠（pH 7.6）和0.1%（v/v）Tween-20（TBS-T）中转移2%封闭试剂（GE Healthcare）1小时后，立即封闭印迹。将印迹在1∶10000稀释的一级抗体中在室温下搅拌孵育1h。倾析抗体溶液，并短暂漂洗印迹两次，然后在室温下搅拌下在TBS-T中洗涤一次15分钟和3次5分钟。在室温下，将印迹在2%封闭溶液中稀释至1:50000的第二抗体（抗兔IgG马萝卜过氧化物酶缀合物）中搅拌孵育1h。如上所述洗涤印迹，并根据制造商说明用化学发光检测试剂显影5分钟。使用CCD成像器（FluorSMax，Bio-Rad）和Quantity One软件（Bio-Rad）获得印迹的图像。
部分引用文献：
- Durall et al. (2021). Production of succinate by engineered strains of Synechocystis PCC 6803 overexpressing phosphoenolpyruvate carboxylase and a glyoxylate shunt. Microb Cell Fact. 2021 Feb 8;20(1):39. doi: 10.1186/s12934-021-01529-y. PMID: 33557832; PMCID: PMC7871529.
- Wang et al. (2021). Brassinosteroids inhibit miRNA-mediated translational repression by decreasing AGO1 on the endoplasmic reticulum. J Integr Plant Biol. 2021 May 21. doi: 10.1111/jipb.13139. Epub ahead of print. PMID: 34020507.
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