一.背景信息:
Maskin是在非洲爪蟾卵母细胞和胚胎中发现的酸性转化盘管(TACC)结构域蛋白的成员;它涉及到纺锤体的协调,并已被报道能介导细胞周期蛋白B1 mRNA的翻译抑制。
二.结果:
maskin mRNA在4期卵母细胞的起始阶段被翻译抑制,在6期卵母细胞能被激活。maskin mRNA的翻译抑制与4期卵母细胞短聚(a)尾的存在相关。maskin的3' UTR可以将转译调控传递给报告基因mRNA,人TACC3的3' UTR也可以传递给报告基因mRNA。保守的GUCU重复元件在4期和6期卵母细胞中均有抑制翻译的作用,但该元件的缺失并不能消除对4期卵母细胞的抑制作用。UV交联实验表明,重叠的蛋白可以有效地结合到maskin和cyclin B1 3’UTRs上。如前所述,CPEB与cyclin B1 3' UTR结合,但其与maskin 3' UTR的结合极少。通过RNA亲和层析和质谱分析,鉴定出胚胎死亡酰化元件结合蛋白(EDEN-BP)是同时与maskin和cyclin B1 3’UTRs结合的蛋白之一。
结论:
Maskin mRNA至少受两个阻遏因子和一个激活因子的翻译调控。进化上保守的GUCU重复序列是抗逆性元件之一。EDEN-BP同时与maskin和cyclin B1 3’UTRs结合,表明它可能参与了这些mRNAs的死亡磷酸化。
三.具体过程:
为了研究Maskin在卵发生过程中对cyclin B1的翻译抑制作用,我们对不同阶段的卵母细胞进行了western和northern blot检测(Dumont, 1972)。从图1可以看出,cyclin B1 mRNA在2期以后表达量最高,而蛋白在6期表达量较弱,在成熟的卵母细胞中表达量最高,说明cyclin B1 mRNA在早期卵母细胞中被翻译抑制。maskin mRNA在2期以后也有类似的表达,而蛋白在6期以后表达量最大(在其他卵母细胞批次中)
Figure 2
四,实验证明
证明了maskin mRNA在早期4期卵母细胞中被其3' UTR转录抑制。maskin mRNA的翻译激活与其poly(A)尾巴的延伸相一致。3’UTR中元素的映射发现,它包含两个抑制元素,其中一个是保守的GUCU重复序列。由于GUCU单独重复仍然抑制6期卵母细胞的翻译,maskin 3' UTR的其他序列必须介导翻译激活。紫外交联实验表明,具有相似组成的蛋白复合物与细胞周期蛋白的是EDEN-BP。