平端连接通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3...
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PCR技术（十）：PCR产物克隆方法
平端连接通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效 率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能 在两6条DNA链的3&#...
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对PCR扩增产物分析
1、凝胶电泳分析PCR产物电泳，EB溴乙锭染色紫外仪下观察，初步判断产物的特异性。PCR产物片段的大小应与预计的一致，特别是多重PCR，应用多对引物，其产物片断都应...
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克隆PCR产物问题与解答
1)克隆PCR产物的最优条件是什么？最佳插入片段：载体比需实验确定。1：1（插入片段：载体）常为最佳比，摩尔数比1：8或8：1也行。应测定比值范围。连接用5ul 2...
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内切酶在PCR反应产物中的活性(Activity of Restriction Enzymes in a Primer Extensio
通常PCR反应以后还要对产物进行酶切才能进入下一步工作。为了方便起见，我们可以将内切酶直接加入到PCR反应产物中去，而省略了纯化产物的步骤。下表归纳了在PCR产物混...
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可溶性产物的纯化(融合T7·Tag的表达蛋白)
大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在，需要不同的纯化策略。现在，许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能，这些自然需要将蛋白质分离出来后，进行进一步的研究来...
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在大肠杆菌（E.Coli）表达蛋白产物
一、原理 1、 E . coli 表达系统 E . coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E . coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达...
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酵母菌载体与克隆基因表达产物的检测
利用滤纸提取检测法筛选表达β半乳糖苷酶的酵母菌落材料与仪器包含lacZ融合基因的酵母菌株选择培养基平板 液氮 Z缓冲液 20 mg mL×-gal溶于二甲基甲酰胺3...
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PCR扩增产物出现杂带怎么办？
可能的原因和对应的解决方案如下：1.引物用量偏大，引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。2.循环的次数过多。适当增加模板的量，减少循环次数。3.酶的用量偏...
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克隆化的PCR产物连入T载体
原理由 Taq DNA 聚合酶 PCR 扩增产生的带 3' 突出端为 A 碱基的 DNA 片段能高效地克隆至 T 载体上，这种 T 载体有与 A 碱基互补...
