生物知识 四步法消除SYBR Green Ⅰ实时定量RT2PCR中引物二聚体 张驰宇1 ,2) , 张高红1 ,2) , 杨 敏1) , 贲昆龙1) 3 (1) 中国科学院昆明动物研究所分子与细胞免疫学实验室,昆明 650223 ;2)... 05月11日 发表评论 阅读全文
生物知识 About LacZ,IPTG and X-Gal 载体操作中最常用的几个概念:1. The lac Z gene may be used as a simple "reporter" gene,... 05月11日 发表评论 阅读全文
生物知识 PCR常见问题及解答 1、PCR产物的电泳检测时间? 一般为48 h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48 h后带型不规则甚致消失。 2、假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①... 05月11日 发表评论 阅读全文
生物知识 DD-RT-PCR定义是什么? 传统mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)是根据绝大多数真核细胞mRNA3'端具有的多聚腺苷酸尾(polyA)结构,因此可用含oligo(dT)的寡聚核... 05月11日 发表评论 阅读全文
生物知识 PCR引物设计的原则与要点 DNA 聚合反应(即错配)。 引物设计应注意如下要点: 1 引物的长度一般为15-30 bp,常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于... 05月11日 发表评论 阅读全文
生物知识 实时荧光定量PCR进展及其应用 荧光实时定量PCR技术最早在1992年由一位日本人Higuchi第一次报告提出,他当时想实时看到PCR反应的整个过程,由于当时EB(溴化乙锭)的广泛使用,最直接想到... 05月11日 发表评论 阅读全文
生物知识 PCR技术:扩增较大片段DNA的PCR方法 一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性: 通常所用的PCR方法都在两个方面有局限,即目标产物精确程度和合成片段的大小。Pfu(Pyrococcus furi... 05月11日 发表评论 阅读全文
生物知识 PCR操作范例及反应体系的组成 一、PCR操作范例 在一个典型的PCR反应体系中需加入:适宜的缓冲液、微量的模板DNA、4×dNTPs、耐热性多聚酶、Mg 2+ 和两个合成的DNA引物。模板D... 05月11日 发表评论 阅读全文
生物知识 Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) The Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) method is based on the Polymerase Chai... 05月11日 发表评论 阅读全文
生物知识 PCR-SSCP(Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism) 【实验目的】 1.了解PCR-SSCP技术的原理。 2.了解并熟悉PCR-SSCP技术的步骤。 【实验原理】 PCR-SSCP是1989年日本Orita等创建的筛查... 05月11日 发表评论 阅读全文