猪传染性胸膜肺炎 (PCP)酶联免疫分析（ELISA）

猪传染性胸膜肺炎(PCP) 酶联免疫 分析（ ELISA ）

试剂 盒使用说明书

本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中传染性胸膜肺炎(PCP)水平。

实验原理 ：

本试剂盒 采 用 双抗体夹心法测定血清或血浆中猪 传染性胸膜肺炎(PCP) 。 用纯化的 猪传染性胸膜肺炎(PCP) 抗体 包被微孔板，制成固相抗 体 ， 可与样品中 传染性胸膜肺炎(PCP) 相结合 ， 经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后 再与HRP 标记的 传染性胸膜肺炎(PCP) 抗体结合 ，经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值） ，与CUTOFF 值相比较，从而判定标本中 猪传染性胸膜肺炎(PCP) 的存在与否。

试剂盒组成 ：

样本处理及要求 ：

1.血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8 ℃的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融 .

7. 不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤 ：

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、 阳性对照2 孔、空白对照 1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50 μl 。然后在 待测样品孔 先加样品稀释液50

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