正常大鼠唾液腺上皮细胞的培养

实验材料:

1. 新生大鼠唾液腺

2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2;

3. 培养用液:DMEM培养液,添加10%的胎牛血清、5μg/ml胰岛素、10 ng/ml表皮生长因子、50 ng/ml氢化可的松、100 IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素。无Ca2+ 、Mg2+ 的D-Hanks液,使用时添加100 IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素;

4. 鼠尾胶原液:先吸取4ml鼠尾胶原溶液放入冰浴中的青霉素小瓶,加入0.5ml的10×DMEM培养基。混匀后,再加入浓度为0.34 mol/L的NaOH 0.1ml快速混合(鼠尾胶原液的配制比例,按鼠尾胶原液与10×DMEM及0.34 mol/L NaOH三者的体积比为8:1:1配制),并立即加到24孔培养板中(每孔0.8ml),于37℃下放置30min;

5. 将配好的鼠尾胶原溶液涂布在预先灭菌处理过的盖玻片上,使其凝固;

6. 将鼠尾胶原包被的盖玻片放入24孔培养板内,用D-Hanks液平衡1h,备用;

实验方法:

1. 在无菌条件下取出新生大鼠(10g)的腮腺或颌下腺组织,仔细分离腺体周围的结缔组织,用无Ca2+ 、Mg2+ 的D-Hanks液将腺组织冲洗干净;

2. 将腺体组织剪成1—2mm3大小的植块,洗净植块上的血液和粘液;

3. 按一定密度(即植块与植块之间相距2mm左右),将植块种植到包被有鼠尾胶原的盖玻片上;

4. 加入DMEM培养液。每周换液1次;

5. 细胞长满后,在细胞传代的过程中去除植块。

内容来源:生物资料网,如果侵权麻烦联系网站工作人员删除!

艾美捷科技优势代理品牌

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen: