一、油红O染色实验准备
1、仪器耗材：生物组织摊烤片机、3DHISTECH扫描仪、显微镜、盖玻片、载玻片
2、染色试剂：普拉特泽改良油红O染色液、甘油明胶、无水乙醇、二甲苯
3、待测组织的冰冻切片
二、油红O染色实验步骤
1、冰冻切片厚度6～10 µm，不固定或10%福尔马林固定10 min后水洗。
2、切片入蒸馏水中稍冲洗。
3、切片入70%的乙醇内浸洗20～30 s。
4、切片入改良油红O染色液中(加盖)，密闭染色10～15 min。
5、分色：入70%的乙醇内稍洗以便去除染液。
6、入蒸馏水中稍微清洗。
7、苏木素染色液复染核1～2 min。
8、(可选)1%的盐酸溶液稍微分化一下。
9、(可选)自来水漂洗10 min或稀碳酸锂溶液中促蓝。
10、入蒸馏水中稍微清洗。
11、用滤纸吸干周围水分。
12、甘油明胶或阿拉伯糖胶封固。
三、油红O染色注意事项
1、石蜡切片不能用于油红O染色，原因在于石蜡包埋过程中需要脱水，脱水过程中需要乙醇-二甲苯和石蜡，二甲苯是有机溶剂，会把中性脂肪溶解；、
2、冰冻切片准备时，包埋的降温过程建议选择干冰，原因在于若选择液氮降温过程较强烈，可能导致组织内部炸裂，而干冰降温的过程比较缓和，染出来的片子比较好看；
3、切片的厚度要稍微厚一些，建议选择8-10 μm；
4、实验设计建议设计阴性对照和阳性对照，如阳性对照可以用脂质丰富的肝脏组织等，阴性对照可以根据文献来选择无脂肪沉积的组织。
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