材料与仪器
乙醇 曙红Y 梅耶苏木精 超纯水 二甲苯圆锥管 镊子 破璃染缸
步骤
一、材料1.缓冲液、溶液和试剂100%乙醇70%乙醇曙红Y(Sigma)梅耶苏木精（Sigma)DEPC处理的超纯水(BiotecxLaboratories，储存于4°C)二甲苯(Sigma)2.特殊设备圆锥管，50ml镊子破璃染缸（用于二甲苯的盛放）3.细胞和组织来自方案1的片子二、方法染色应尽可能和LCM操作之间安排紧凑，尤其是H20和最后一步的乙酵一定要新鲜。要时刻记住降解的RNA数量与固定后样品在水相中的时间成正比（为了得到高质量的RNA，最好不要超过5mm)。在所有的步骤中都使用DEPC处理的水。最后一步的乙醇和二甲苯可能吸潮，如果湿度较高，推荐将片子在100%乙酵中过3次，第二次放于二甲苯中时洗2min。如果湿度低，省略第三次的纯乙醇，并缩短二甲苯的时间到30s。在每进行下一步之前都要擦掉片子边缘和背部的水。有时片子排拒溶液，必要时重复。用镊子夹住片子。1.准备染色液（图11-3)。2.浸于70%的乙醇中30s。3.纯水洗（不要用PBS代替水，如果选用了PBS就会导致组织与LCM膜间黏着欠佳），在染缸中上下移动切片，5~30s。4.梅耶苏木精（Mayer’shematoxylin)30s5.纯水洗（不要用PBS代替水，如果选用了PBS就会导致组织与LCM胰间黏着欠佳），在染缸中上下移动切片，5~30s。6.70%的乙醇洗30s。7.100%的乙藓洗30s。8.曙红Y中30s。9.100%乙醇洗30s,重复2~3次。10.二甲苯洗0.5~2min，2次。此时用于LCM样品准备完毕。
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