用非同位素探针进行原位杂交和检测实验-地高辛标记探针的信号放大

材料与仪器

10μg ml 羊抗地筒辛抗体 Fab 片段 溶于 4×SSC 1% m VBSA (组分V) 地高辛信号放大溶液:3. 5〜7. 0 ug ml荧光素标记的兔抗羊IgG (Sigma) 溶于 4×SSC 1% m V BSA (组分 V)Parafilm 膜 玻片

步骤

1) 用地高辛标记的探针与切片杂交并洗片。

2) 加50μL 10 /ng/ml的羊抗地高辛抗体Fab片段于玻片上,盖以22 mm2大小的Para- film 膜,置 37℃温育 30 min。

3) 移去Parafilm 膜,分别在 4×SSC、0.1 % Triton×-100/4 ×SSC、4×SSC 中洗片, 每次15 min。

4) 吸去残余4×SSC,加50μL地高辛信号放大溶液于玻片上,盖以22 mm2的Para- film膜,放加湿盒中。加湿盒外裹以铝箔,置37℃温育30 min。

5) 重复步骤3洗片。

6) 复染,固定并镜下观察结果

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