单克隆抗体(mAb) V 区cDNA 序列的克隆是构建单链抗体(ScFv) 的关键一步[1 ] 。通常是在抗体V 区序列两头5′和3′端设计带简并碱基的引物, 用普通PCR 法进行扩增[2 ] 。该法虽看似简单, 但局限性很大, 若遇到同源性差且复杂的序列, 则难以获得。同时, 因带有简并碱基, 可使PCR 产物不纯, 而影响蛋白的表达及其功能。我们在构建抗人宫颈癌ScFv 过程中, 用常规PCR 法扩增出VL cDNA 序列, 经多 种方法尝试, 均未获得VH cDNA 序列。随后, 采用反向PCR 技术扩增并经测序证明, 确为VH cDNA 序列, 为重组制备ScFv 奠定了基础。
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