DNA 在含有异丙醇的溶液中比在含有乙醇的溶液中难溶。乙醇沉淀法需要2 ~ 3 倍体积的乙醇,异丙醇沉淀则需要0.6 ~ 0.7 倍的体积。沉淀大体积溶液中的DNA 时,异丙醇是比较好的选择。在室温用异丙醇沉淀减少了一些蔗糖或者氯化钠和DNA 发生共沉淀的现象。但异丙醇还是有一些不足之处:
- 盐在35 %的异丙醇溶液中比在65 %的乙醇溶液中难溶。
- DNA 沉淀是半透明的,肉眼难以观测,异丙醇较乙醇不宜挥发,因此很难除去。
- 最后,异丙醇沉淀的DNA 与微量离心管管壁结合较松,在吸取异丙醇或用乙醇洗沉淀的时候容易丢失( 见步骤5)
通常情况, DNA 乙醇沉淀法为首选,除非有必要使用较小的上清液体积。
试剂
DNA 样品
乙醇
异丙醇
乙酸钠( 3mol/L, pH 5.2 )
TE (pH 8.0 ) <A>
设备
真空吸气器
方法
- 4℃ 离心防止样品过热。
- 残留的异丙醇阻碍DNA 被再次溶解。
- 不能让DNA干燥得太彻底,否则,沉淀将会非常难溶解。当步骤8加入缓冲液时,沉淀应仍保待湿润。
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