1、 培养用液：
PBSA ；
胶原酶： I 型，用 D － Hank’s 液配制， 625U/ml ；
培养液： DMEM ＋ 10 ％ FBS ；
2、 Protocol ：
u 取拔除的正畸牙或阻生牙（年龄小者较佳），尽量完整的取出牙髓，置于培养皿中，用 PBS 冲洗；
u 将牙髓放入离心管，加入胶原酶 2 － 3ml/ 牙， 37 ℃ ， 2 － 3 小时（原则是将牙髓消化彻底）；
u 加入等量培养液，吹打至单细胞，离心，重悬，接种，牙 /6well ；
牙周细胞的培养
1、 培养用液：
PBSA ；
胶原酶： I 型，用 D － Hank’s 液配制， 625U/ml ；
培养液： DMEM ＋ 10 ％ FBS ；
2、 Protocol ：
u 取拔除的正畸牙或阻生牙（年龄小者较佳），置于培养皿中，用手术刀仔细刮除附着在牙根上的牙龈组织，然后用 PBS 反复冲洗，以去除残余组织以及牙根表面的血细胞；
u 将牙放入离心管，加入胶原酶 2 － 3ml/ 牙， 37 ℃ ， 1 小时；
u 加入等量培养液，仔细吹打牙根表面，收集细胞，离心，重悬，接种，牙 /6well ；
*培养获得的细胞是牙周膜细胞和成牙骨质细胞的混合体 !
PS：
u 年龄对细胞产量以及活力影响较大，最好选用年龄在 10 － 14 岁之间的正畸牙或阻生牙；
u 如果选用大鼠牙齿作为培养目标，培养液应稍作调整，基本原则是抑制细胞的衰老，具体做法是：适当降低血清浓度（选用进口血清最佳），如果降低血清浓度后，细胞增殖减慢，可加入促进细胞增殖的因子（例如BPE 25ug/ml等）。
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