一、实验原理血管生长是肿瘤发生的关键步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2 mm，都会有血管生成，这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速，因此，血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用，抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。体外的血管生成实验能很好的模拟肿瘤的血管发生过程，并且适合研究药物对这一过程的影响。二、实验步骤1.细胞复苏(1) 将ddH2O预温至37℃。(2) 戴上手套和口罩帽子，从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管（内有1 mL细胞混合液），立即投入37℃ ddH2O中，轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。(3) 完全溶解后，75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后带进超净台。(4) 在超净台中，在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基，打开冻存管，将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中，常温1000 rpm离心3分钟，吸除上层的培养液。(5) 1mL培养基重悬细胞沉淀，轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中，补足培养基至5 mL，置于37℃、5% CO2培养箱培养。(6) 48小时后换液，细胞融合接近80%时即可传代。7.2 细胞培养内皮细胞用含10%胎牛血清、1%双抗的DMEM培养基在37℃饱和湿度、含5%CO2的孵箱中培养。7.3 血管形成实验(1) 用预冷的枪头吸取100μL基质胶加入96孔板中，培养箱静置1h，待其凝固；(2) 取数生长期，生长状态良好的各组细胞用0.25%胰酶消化后，通过细胞计数计算后，按照密度为2×104个细胞/孔，同时按实验设置添加药物处理。(3) 4-6h观察成管情况。
三、实验结果
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