一、仪器与试剂
护目镜、厚毛线手套等
二、操作流程
复苏
1)将恒温水浴锅中的水预热到 37℃;
2)准备一支 15ml 离心管,加入 5ml含 10%FBS 的完全培养基,放入 37℃水浴锅中预热;
3)戴上护目镜,厚毛线手套后,从液氮罐中取出要复苏的细胞,尽快转入 37℃恒温水浴锅中复温晃动冻存管以提高复温速率;
4)将融化了的冻存管中的细胞吸入事先准备的离心管中,混匀后,1000rpm离心 5min;
5)准备一个 T-25培养瓶,写上细胞名称、日期,再加入 4ml 完全培养基;
6)离心完成后弃去上清,用 1ml 完全培养基重悬细胞后,转入 T-25细胞培养中,混匀后转入
注意:从液氮中取出细胞冻存管时,若冻存管内有液氮进入,需拧松冻存管,排出内部残留的液氮,之后拧紧冻存管,置于干冰上,然后放入 37℃水浴中,避免温差太大造成液氮快速气化而爆炸
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