小鼠肺上皮MLE-12细胞

细胞特性

1）来源：小鼠肺

2）形态：上皮细胞样

3）含量：>1x106个/mL

4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后

立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生

长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞用途：仅供科研使用。

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，酒精消毒瓶壁并将T25瓶置于37℃培养

约2-3h。

3）T25瓶中的培养基取出离心后，去上清，添加6ml新的完全培养基，重新加

入原T25培养瓶。

4）如果细胞长满90%请及时进行细胞传代，传代培养用本公司附带的完全培养

基。

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备D/f12培养基；优质胎牛血清，2-5%；胰岛素0.005mg/ml,双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离

心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去

上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中

培养，补加培养基至6ml。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.将上清取出，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培

养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部

分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基

终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，和上清一起在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清

液，加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：

2到1:4比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；

1，细胞冻存时，取出上清，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落

后，加入1ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2，4min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加

入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度1-2xE6/ml，每支冻存

管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液

氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项：

1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立

即与我们联系。

2.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注

意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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