材料与仪器
器材：
①注射器
②无菌手术器械
③细胞培养皿
④移卵针
⑤38 ℃、5％CO2培养箱
⑥倒置显微镜、显微操作仪
⑦PCR 仪
试剂：
①材料：兔
②孕马血清促性腺激素、人绒膜促性腺激素
③M2 培养液、M16 培养液
④透明质酸酶
⑤戊巴比妥钠溶液
⑥70％ 乙醇
步骤
1.超数排卵
（1）在实验开始的第 1 天，供体兔肌内注射 PMSG（150 U），FSH 在实验开始的前天每 12 小时皮下注射一次，剂量 0.5 AU，共 6 次。
（2）第 4 天，供体兔分别与两只雄兔交配，以保证能够受精。
（3）交配以后，静脉给予人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin，hCG）100 U，诱导排卵。
2．胚胎采集
（1）用合适的缓冲液或培养液，例如 10％FBS-PB1 或 M2 培养液，冲洗输卵管，获得受精卵。一般可收集交配（注射 hCG）17～19 小时后家兔的受精卵用于显微注射。
（2）用合适的麻醉剂过量麻醉处死供体家兔，分离其输卵管和部分卵巢。在输卵管壶腹部，可以看到有卵细胞存在。用 10 mL 注射器连接 18 号针头，从卵巢一侧插入，用 5～10 mL 液体冲洗输卵管，在输卵管另一侧将含有受精卵的液体收集于试管或平皿中备用。
3．原核显微注射
（1）利用显微操作仪，在显微镜下将外源 DNA 溶液注射到原核里。
（2）显微注射针刺进雄性原核后保持位置不变，向雄性原核注射 DNA 溶液，如注射成功，可见雄性原核稍微膨胀。用于显微注射的 DNA 溶液的纯度和浓度非常重要，如果 DNA 纯度不好，含有的杂质很容易堵塞注射针尖；如果 DNA 浓度过高，会影响胚胎的发育。
4．胚胎移植
（1）胚胎移前，代孕家兔应采用合适的药物麻醉。
（2）代孕雌兔在供体雌兔注射 hCG 的同时给予 50 UhCG。受精卵显微注射后可在 CO2培养箱内培养 2～3 小时（5％CO2,38.5 ℃）。给每只代孕家兔移植 20～30 枚 CO2培养后存活的受精卵。CO2培养箱内培养 2～3 小时，受精卵的存活率为 80％～90％，熟练的技术是受精卵高存活率的保证。
5．转基因的鉴定
（1）通常剪取 4 周龄家兔少许耳组织或采取血样，提取基因组 DNA，用 PCR 或 Southern blotting 法筛选转基因家兔。
（2）如果转基因翻译出来的蛋白质可分泌至血液或乳汁中，可直接采用 Western blotting 或 ELISA 检测。一般转基因效率为 1.5％～16.7％（平均约 6％）。
（3）转基因模型兔和野生型家兔交配，检测转基因在动物体内的整合情况，看是否能将转基因遗传给后代和是否在预先设定的特异器官或组织表达。
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