中性蛋白酶(Dispase)是一种无哺乳动物源(AOF)的金属中性蛋白酶,采用沃辛顿公司研发的方法进行纯化。其温和的蛋白水解作用使该酶特别适合用于原代细胞和传代(继代培养)细胞培养的制备,因为它对细胞膜较为温和。这种蛋白酶还可作为细胞分离和组织解离应用中的辅助酶,通常与胶原酶一起使用。
产品核心特性:
·来源:细菌 Bacillus polymyxa,切割纤维连接蛋白(Fibronectin)和 IV 型胶原,温和解离细胞间连接。
·适用场景:所有规格通用,包括心脏组织消化、神经细胞分离、肿瘤微环境分析和内皮/上皮细胞分离。
·优势: 活性不受血清抑制,对细胞损伤小,适合活细胞实验(如 scRNA-seq、流式细胞术);不含动物源性成分,符合临床前研究标准。
心脏组织消化 与胶原酶 IV 和 DNase I 联用,用于心肌细胞和血管内皮细胞分离 |
神经细胞分离 背根神经节(DRG)、中枢神经元或小胶质细胞解离 |
肿瘤微环境分析 实体瘤组织消化(与胶原酶/DNase I 联用) |
三款货号的差异(仅包装规格不同)
货号 | 包装量 | 储存形式 | 适用实验规模 |
LS02100 | 1 克 | 冻干粉 | 小规模实验(单次或少量样本) |
LS02104 | 5 克 | 冻干粉 | 中规模研究(多次实验或高通量筛选) |
LS02106 | 25 克 | 冻干粉 | 大规模生产或长期需求(工业级) |
典型应用方法(所有规格通用)
1. 心脏组织解离:
·浓度:1.2 U/mL(或 100 μg/mL)
·缓冲液:含 Ca??/Mg??的 DPBS
·联用酶:胶原酶 IV(LS004186) + DNase I(LS002007)
·条件:37°C 消化 40-45 分钟。
2. 神经组织解离:
·浓度:0.7 U/mL(或 50-100 μg/mL)
·联用酶:胶原酶 + DNase I(DRG) 或 木瓜蛋白酶(脑/脊髓组织)
·条件:37°C 或低温 25°C(神经元保护)。
3. 肿瘤组织解离:
·浓度:0.5-2.0 mg/mL(依组织硬度调整)
·联用酶:胶原酶(LS004154) + DNase I
·条件:37°C 消化 30-60 分钟。
根据组织类型调整浓度:
·高硬度组织(如实体瘤、成体心脏):1-2 mg/mL。
·脆弱组织(如胚胎组织、神经元):0.5-1 mg/mL。
其它产品信息:
特性 | 详情 |
分子量 | 36 千道尔顿(kDa) |
最适 pH | 在较宽 pH 范围(4.0-9.0)内稳定,最适 pH 为 5.9-7.0 |
稳定性 / 储存条件 | 2-8°C 下可稳定保存 12 个月;用水或常用平衡盐溶液 / 培养基复溶后需分装并冻存于 - 20°C |
特异性 | 非特异性切割含有亮氨酸(Leu)和苯丙氨酸(Phe)的肽键 |
激活剂 | 二价阳离子(如 Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+) |
抑制剂 | EDTA(1mM)、EGTA、1-10 - 邻菲罗啉及重金属离子 |
应用 | 常用于分离表皮与真皮(保留完整上皮层)、干细胞、肝细胞及其他细胞的分离; 由于涉及变量多样性,具体分离条件需针对每种细胞 / 组织通过实验确定 |
参考文献:
1. PDFM. Corrales, Benjamin T. Cocanougher et al. “A single-cell transcriptomic atlas of complete insect nervous systems across multiple life stages.” Neural Development[2022-08-24]
2. U. Laemmli. “Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4.” Nature[1970-08-15]
3. PDFO. H. Lowry, N. J. Rosebrough et al. “Protein measurement with the Folin phenol reagent..” The Journal of biological chemistry[1951-11-01]
4. PDFBenjamin T. Cocanougher, J. Wittenbach et al. “Comparative single-cell transcriptomics of complete insect nervous systems.” bioRxiv[2019-09-30]
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7. PDFSiyeon Rhee, D. Paik et al. “Endocardial/endothelial angiocrines regulate cardiomyocyte development and maturation and induce features of ventricular non-compaction.” bioRxiv[2020-07-26]
8. PDFA. Pippow. “Differences of Ca2+ Handling Properties and Differential Processing of Olfactory Information in Identified Central Olfactory Neurons.”[2008-05-16]
9. PDFTianying Su, Geoffrey M. Stanley et al. “Single cell analysis of early progenitor cells that build coronary arteries.” Nature[2018-05-30]