外泌体提取步骤

一、什么是外泌体?

外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡,直径约为 30-200 nm,密度在 1.13-1.21g/ml,具有杯状形态、双层膜结构,天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中。包括肿瘤细胞在内几乎所有类型的细胞(免疫细胞、神经细胞、干细胞),都可以产生并释放 exosome。目前外泌提取主要有超速离心、过滤离心、试剂盒提取等方法。

二、实验流程

血清/血浆样本:

1,分离得到血浆/血清。

2.低速离心去除碎片及杂质。

3.超速离心获得外泌体沉淀。

4.外泌体纯化。

5.BCA法检测外泌体浓度。

培养上清样本:

1.培养液收集。

2.低速离心去除细胞、碎片及杂质。

3.超速离心获得外泌体沉淀。

4.外泌体纯化。

5.BCA法检测外泌体浓度。

即在4℃下,首先300Xg离心10min,吸取上清液,然后2000Xg离心10min;吸取上清液后,10000Xg高速离心30min,吸取上清液;140000Xg超速离心90min;除去上清液,所获得的沉淀即为外泌体。用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬后,140000Xg再次离心90min,100μLPBS缓冲液重悬沉淀,冻存于-80℃备用。

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