一、实验样本及分组
样本：大鼠脑
二、实验结果
三、实验结论
凋亡/阳性细胞呈深棕色。四、实验材料
1.主要仪器
2.主要试剂
一、实验原理
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180~200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素标记的dUTP，在DAB的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），从而可以通过显微镜检测细胞凋亡的情况。二、方法步骤
1.脱蜡
1) 65℃烤片2 h；
2) 二甲苯（I）中脱蜡10 min；
3) 二甲苯（II）中脱蜡10 min；
4) 100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；
5) 100%乙醇（II）中5 min洗去二甲苯。
2.水化
1) 95%乙醇中水化5 min；
2) 85%乙醇中水化5 min；
3) 75%乙醇中水化5 min；
4) 蒸馏水中水化待用。
3.通透
1) 蛋白酶K修复：每个样本上滴加100 μL蛋白酶K工作液，37℃反应30 min；
2) PBS浸洗3次各5 min。
4.标记
1) 每样滴加50μL的Tunel反应混合物，37℃避光孵育60 min；
2) PBS充分浸洗3次各5 min；
3) 每个样本滴加50 μL converter-POD工作液，湿盒中37℃避光反应30 min；
4) PBS充分浸洗3次各5 min。
5.显色
1) 根据说明书配制DAB显色液；
2) 每个样本滴加50 μL DAB显色工作液，室温显色30 s；
3) 蒸馏水稍洗终止显色。
6.复染
1) 苏木素染色30 s；
2) 流水冲洗2 min。
7.分化返蓝
1) 1%盐酸酒精分化2 s；
2) 流水冲洗切片5 min。
8.脱水
1) 蒸馏水过洗1~2 s；
2) 85%乙醇脱水5 min；
3) 95%乙醇脱水5 min；
4) 无水乙醇脱水5min；
5) 无水乙醇脱水5 min。
9.透明
1) 二甲苯（I）透明5 min；
2) 二甲苯（II）再次透明5 min。
10.封片
1) 在石蜡切片的中央滴加适量中性树胶，盖上盖玻片封固；
2) 在通风橱内室温晾干。
11.镜检
1) 显微镜下观察拍照。
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