一般情况下,血清沉淀不会影响细胞培养效果,但是出于一致性等方面的考虑,还应尽可能减少在使用或运输过程中,人为因素导致的血清沉淀。
1、正确的运输温度:运输过程中,要严格-20℃低温,避免反复冻融。
2、使用正确的融化方法:在使用时,正确的解冻方法也很重要,这里推荐使用国际上通用的“三步法”解冻。
操作 |
温度 |
100ml |
500ml |
1000ml |
第1步 |
室温 |
35 min |
90 min |
100 min |
或15-20℃水浴 |
5 min |
18 min |
20 min |
|
第2步 |
20℃水浴 |
15 min |
25 min |
30 min |
第3步 |
37℃水浴 |
20 min |
35 min |
45 min |
需要注意的是,如果血清是储存在-80℃冰箱中,正式解冻前应先转移至-20℃冰箱中过渡。一次解冻后,分装至无菌离心管中,尽量保证每管是一次的用量,分装管解冻也遵循三步法,解冻后需全部用完。
3、使用正确的储存方式:长期储存在 2-8℃或在室温下放置时间过长,都会引起沉淀,建议配制好的培养基在4℃冰箱中存放不要超过7天,血清分装好后-20℃储存。
4、特殊的处理:γ射线照射与热灭活也容易引起沉淀析出,因此要注意射线照射剂量以及热灭活方法(40℃水浴加热20分钟即可)。常规实验中用到的胎牛血清,无需热灭活。
那么,如果想去除细胞培养过程中,血清中沉淀,又该如何操作呢?
如果要除去血清中的沉淀,可以将血清分装至无菌离心管中,大约400g 离心,留上清即可。由于滤膜容易被沉淀堵塞,因此不建议用过滤的方法。
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