PCR介导基因破坏法1． 反应混合物：5 μ l 10 ×Taq缓冲液5 μ l 25mmol/L MgCl22 μ l 10mmol/L dNTPs10~100n...
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酵母遗传学方法2：蛋白质的抽提
酵母蛋白质的抽提此法抽提的酵母蛋白适用于 SDS 凝胶电泳和 Western 印迹分析。1． 从 OD600 ＝ 2 的细胞培养物中抽提酵母蛋白质。培养物的一种简单...
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酵母遗传学方法5：酵母β－半乳糖苷酶的测定
酵母β－半乳糖苷酶的测定1）粗提取物测定1． 在适当温度下（通常 30 ℃），用适当培养液将 5ml 细胞培养物培养到浓度为 1 × 107 ～ 2 × 107 细...
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酵母遗传学方法12：酵母菌落PCR方法
酵母菌落PCR方法1． 在冰上配制反应混合液：2 μ l 10 ×菌落 PCR 缓冲液1.2 μ l 25mmol/L MgCl20.4 μ l 10mmol/L ...
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毕式酵母表达常见问题及回答
相关专题 1、问：我用毕式酵母表达一个27KD的蛋白，小量表达并做SDS-PAGE有一条类似三聚体的条带。用大量表达，表达上清用镍柱进行亲和层析 ，在FPLC上可以...
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酵母遗传学方法10：固定化细胞的肌动蛋白染色
固定化细胞的肌动蛋白染色1． 培养细胞到对数生长期（约 107 细胞 /ml ）。2． 直接取 0.1ml 甲醛加到含有 1ml 培养物的离心管中固定细胞（甲醛浓度...
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酵母遗传学方法9：酵母免疫荧光
酵母免疫荧光1）细胞制备1． 培养 5ml 酵母至对数生长早期（ 106 ～ 107 细胞 /ml ）。2． 直接加 1/10 体积的甲醛到培养基里固定细胞（加入的...
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酵母遗传学方法8：酵母活体染色
酵母活体染色1）核 DNA和线粒体 DNA1． 当细胞培养到约 107 细胞 /ml 时，离心（ 5 秒）收集细胞，再悬浮在 70 ％乙醇中。2． 固定 5 分钟或...
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毕氏酵母感受态细胞制备及转化
1、毕氏酵母氯化锂转化法（1）试剂1M LiCl（用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌；必要时用消毒去离子水稀释）50% PEG3350（Sigma P3640 用去离...
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甲醇酵母细胞表达系统
分子生物学技术的发展为利用生物反应器生产外源蛋白提供了许多方法和手段。到目前为止，已发展出了大肠杆菌、酵母、昆虫、哺乳动物细胞等多种蛋白表达系统，其中酵母表达系统是...
