生物知识 萤光素酶载体PGL3转染细胞要不要加G418 问:最近要做萤光素酶载体PGL3转染细胞,PGL3载体上面带有neo的抗性标记,有一个老师和我说要培养基里面要加G418筛选,但我查了一些PGL3载体转染的文献,都... 04月21日 发表评论 阅读全文
生物知识 转染细胞不表达怎么办 问:最近做细胞转染,预筛选稳定克隆,载体为pEGFP-N1,pIERS现在是平行做几个基因,转然后,只有空载体和一个基因可以看到绿色荧光,其余均没有,这会是什么原因... 04月21日 发表评论 阅读全文
生物知识 用LIPO2000转染HepG2细胞的问题 乡乡问:最近本人在做HepG2细胞的转染,转染的是GFP质粒,按照LIPO2000的说明书使用后,发现细胞的死亡很严重,24h时差不多死了一半。而且我在转染前细胞密... 04月21日 发表评论 阅读全文
生物知识 转染细胞的问题 问:我想问个问题关于转染细胞的质粒,必须用试剂盒提取的么?用碱裂解法可以么?抽提两次浓缩一次,测得浓度是8点多,ratio是1.814,可以送去转染细胞不?人的细胞... 04月21日 发表评论 阅读全文
生物知识 用EBV转染淋巴细胞建立永生化细胞株的方法 一、 试剂1、 淋巴细胞分离液:避光4度保存,用前在37度水浴中加温。整个分离过程中,温度应控制在8-28度,温度过高或过低均影响分离质量。2、 全培养基(用前配置... 04月21日 发表评论 阅读全文
生物知识 如何得到稳定转染的克隆 问:各位园友,本人今天刚刚做了转染,用的24孔板,质粒是带有荧光的(含neo基因的载体),如果转进去了,下一步就要进行筛选?但是不知道具体该怎么做才能得到稳定转染的... 04月21日 发表评论 阅读全文
生物知识 稳定转染:从G418浓度确定到单克隆化鉴定 一、筛选之前确定G418浓度:1、由于每种细胞对G418的敏感性不同,而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同,一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.7... 04月21日 发表评论 阅读全文
生物知识 细胞转染问题 转染是否成功的影响因素很多,如需要转染的细胞类型(对于困难的细胞系尤其如此),需要被转染的分子(DNA、RNA、寡核苷酸、蛋白质),转染试剂等。但无论在何种情况下,... 04月21日 发表评论 阅读全文
生物知识 invitrogen lipo2000转染试剂 资深用户操作经验总结(难能可贵) lipo2000是各大实验室,科学院,技术实验室最常用的转染试剂,小小的试剂,价格不菲,经常听到客户说严格按照说明书来操作,还会出现这样或者那样的问题。客户经常抱怨... 04月15日 发表评论 阅读全文
生物知识 实验技能的分界点,从细胞转染开始。 这一次的教程是大部分实验人员的分界点,之前无论做什么没关系,但是一涉及到机制的研究,就不可避免地需要外源的手段去改变靶分子的表达。而今天讲的细胞转染就是很重要的环节... 04月11日 发表评论 阅读全文