生物知识 质粒DNA的小量制备 (一)细菌的收获和裂解1.收获1)将2ml含相应抗生素的LB加入到容量为15ml 并通气良好(不盖紧)的试管中,然后接入一单菌落,于30℃剧烈振摇下培养过夜。 2... 04月18日 发表评论 阅读全文
生物知识 穿梭质粒 一、简介利用一个假定的突变通过互补作用克隆酵母菌基因的一般方法。该突变为cdc101-1,它对酵母菌的生长来说既是隐性的又是温度敏感的。它使酵母可以很正常地在30°... 04月17日 发表评论 阅读全文
生物知识 以质粒为模板的 PCR 实验流程 原理聚合酶链式反应热变性温度下成熟质粒可以解螺旋、解聚,暴露的单链核苷酸序列可以作为模板,在特异引物、脱氧核糖核酸酶、DNA 聚合酶等存在的情况下扩增出大量目的序列... 04月15日 发表评论 阅读全文
生物知识 质粒的酵母直接转化 原理将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒;将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中,选择被转化的酵母;再将文库质粒转化到... 04月15日 发表评论 阅读全文
生物知识 电转化法(质粒的转化及转化子的鉴定实验) 一、简介质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中,实现重组克隆的增殖,便于后续分子操作(1)用于基因的克隆增殖;(2... 04月15日 发表评论 阅读全文
生物知识 SDS-蛋白酶K-苯酚抽提质粒DNA 简介SDS-蛋白酶K-苯酚抽提法提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋... 04月14日 发表评论 阅读全文
生物知识 环状质粒 PCR 构建定点突变序列 简介环状质粒 PCR 构建定点突变序列,是指直接将全长双链质粒 DNA 以线性形式扩增,产生一种 DNA 双链上带缺口的突变质粒,该质粒经磷酸化后自身连接形成环状闭... 04月11日 发表评论 阅读全文
生物知识 质粒DNA的提取及其定性定量分析 质粒DNA的提取及其定性定量分析实验的常见问题、关键问题及难点: 基因组DNA的污染、RNA的去除、溶液Ⅱ和 Ⅲ的配置、振摇的力度、酚的抽提、乙醇沉淀、微量操作可能... 04月11日 发表评论 阅读全文
生物知识 重组质粒的提取 质粒提取过程参照E.Z.N.A Plasmid Extraction Kit进行。 (1) 用无菌牙签挑取平板上白色单菌落(5~10个)分别接种至3-5ml LB培... 04月11日 发表评论 阅读全文
生物知识 重组质粒构建 重组质粒构建是常用的分子生物学手段,其实只是最基本的方法,一般一个星期同时构建三二个组质粒是没有问题的。在国内先进的实验中,也大都是由实验员搞定。但是其中还是有些基... 04月10日 发表评论 阅读全文