双向电泳溶液配制方法

A. 裂解液 (lysis solution) (8M Urea, 4%CHAPS, 2% Pharmalyte3-10, 40 ml)

Final concentrationAmountUrea(Fw 60.06)

CHAPS

Pharmalyte3-10

Double distilled H2O

8M	19.2g
4%(w/v)	1.6g
2%	800μl
	To 40ml

新鲜配制或者分装贮存于-20℃ ① 如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M，也可用 7M Urea，2M Thoiurea。 ②其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂或者双性离子去垢剂）可以取代 CHAPS。 ③如果需要，蛋白质酶的抑制剂和或者还原剂可以加入。

B．水化液 （不含有 IPG buffer, Rehydration stock solution without IPG buffer） (8M Urea, 2% CHAPS, bromophenol blue,25ml)

Final concentrationAmountUrea (FW 60.06)

CHAPS

Bromophenol blue

Double distilled H2O

12g	12g
2%(w/v)	0.5g
0.002%(w/v)	50μl
	To 25ml

分装贮存于-20℃ ①DTT和 IPG buffer在用之前加入：每 2.5ml 水化液加 7mg DTT。如果胶内上样，则样品液在用之前加入到 2.5ml的水化液中。 ②如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M。 ③其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂23或者双性离子去垢剂）可以取代 CHAPS。

溴酚蓝储液

Final concentrationAmountBromophenol blue

Tris-base

Double distilled H2O

1%	100mg
50mM	60mg
	To 10ml

C. 水化液 （含有 IPG buffer，Rehydration stock solution with IPG buffer） (8M Urea，2% CHAPS，0.5% or 2% IPG buffer，bromophenol blue，25ml)

Final concentrationAmountUrea (FW 60.06)

CHAPS

IPG buffer(same pH range as the IPG strip)

Bromophenol blue

Double distilled H2O

8M	12g
2%(w/v)	0.5g
0.5%or 2%(v/v)	125 or 500μltd>
0.002%(w/v)	50μl 1% solution
	To 25ml

分装贮存于-20℃ ①DTT和 IPG buffer在用之前加入：每 2.5ml 水化液加 7mg DTT。如果胶内上样，则样品液在用之前加入到 2.5ml的水化液中。 ②IPG buffer 的浓度取决于所用的等电聚焦系统和 IPG胶条的 pH 范围。 ③如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M。 ④其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂或者双性离子去垢剂）可以取代 CHAPS。 ⑤浓度为 0.5%的 IPG buffer用 125μl IPG buffer，浓度为 2%则用 500μl。

D.平衡液（SDS equlibration buffer） (50mM Tris-cl pH8.8, 6M Urea, 30% glycerol, 2% SDS, bromophenol blue, 200ml)

Final concentrationAmount1.5M Tris-cl,pH8.8(see solution F)

Urea(Fw 60.06)

Glycerol(87% v/v)

SDS(Fw 288.38)

Bromophenol blue

Double distilled H2O

50mM	50mM 6.7ml
6M	72.07g
30%(v/v)	69ml
2%(w/v)	4.0g
0.002%(w/v)	400μl 1% solution
	To 200ml

分装 40ml 贮存于-20℃。这是一个贮存液。用之前在加 DTT或者碘乙酰胺。

E.单体贮存液（Monomer stock solution） （30% acrylamide,0.8% N,N!-methylenebisacrylamide,200ml）

Final concentrationAmountAcrylamide(Fw 71.08)

N,N`-methylenebisacrylamide（Fw 154.17)

Double distilled H2O

30%	60.0g
0.8%	1.6g
	To 200ml

用 0.45微米的滤纸过滤。4℃避光保存。

F.4x分离胶溶液(4x Resolving gel buffer) (1.5M Tris-Cl pH8.8, 1000 ml)

Final concentrationAmountTris-base(Fw 121.1)

Double distilled H2O

HCl(Fw 36.46)

Double distilled H2O

1.5M	181.5g
	750ml
	Adjust to pH8.8
	To 1000ml

用 0.45微米的滤纸过滤，4℃保存。

G.10% SDS溶液

Final concentrationAmountSDS(Fw 288.38)

Double distilled H2O

10%(v/v)	5.0g
	To 50 ml

用 0.45微米的滤纸过滤，室温保存。

H.10%过硫酸铵(10% Ammonium persulphate)

Final concentrationAmount Ammonium persulphate(Fw 228.20)

Double distilled H2O

10%	0.1g
	To 1ml

当加入水时，新鲜的过硫酸铵会发出“咔嚓”声音。如果没有声音，则需要换新的药品。用之前配制。

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