材料与仪器
磨细的组织Trizol 氯仿 异丙醇 乙醇 DEPC处理过的水
步骤
一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂Trizol(Invitrogen)氯仿异丙醇乙醇，75%，用焦碳酸二乙酯（DEPC) 处理过的水配制DEPC 处理过的水2. 细胞和组织50~100 mg 已磨细的组织二、方法1. 将 lmlTrizol 加到含 50〜100 mg 磨细组织的微董离心管中。室温下温育 5 min。组织被磨细有助于 Trizol 将其裂解，这一点很重要。2. 加 200ul 氯仿，将管颠倒数次以混合。不推荐进行振荡，因之可导致基因组 DNA 的剪切和 RNA 制备物中 DNA 污染过多。3. 室温温育 3 min，1500 g 离心 15 min。4. 将液相转移到一新管。加 500ul 异丙酵。室温温育 l0 min。5.1500 g 离心 l0miri。RNA 将可见于管底。6. 移弃上清，小心避免扰动沉降物。7. 加 1 ml75% 的乙醇。重悬 RNA。4°C 下 1500 g 离心 5 min。8. 移弃乙醇并风干 RNA。9.RNA 溶解于 DEPC 处理过的水中。当使用以酚为基础的试剂时，为得到足够高的纯度，对得到的 RNA 进行笫二轮酚-氯仿抽提可能是必要的。
