实时荧光定量 PCR（qPCR）是一种常用的分子生物学技术，用于检测和定量目标 DNA 的数量。与常规 PCR 不同，qPCR 可以在 PCR 反应进行的同时测量产生的荧光信号，从而可以实时监测 PCR 反应的过程。
在 qPCR 中，荧光信号与目标DNA的数量成正比，因此可以使用荧光信号来计算目标DNA的浓度。通常使用两种方法来检测荧光信号：SYBRGreen 和探针法。SYBR Green可以结合任何DNA，因此适用于检测多个目标，而探针法则需要针对特定目标设计探针。qPCR 通常由以下步骤组成：
模板 DNA 的制备：通常将 DNA 提取并纯化，以获得高质量的模板 DNA。
引物和探针的设计：引物和探针是用于扩增和检测目标 DNA片段的DNA片段。引物需要设计成能够在目标 DNA 片段的两端精确结合，并且要有足够的特异性，以避免与非目标 DNA 片段发生杂交。
PCR 反应的设置：PCR反应需要引物、荧光染料和模板 DNA，并且要在恰当的温度和时间下进行。
荧光信号的检测：在 PCR 反应进行的同时，荧光信号也会产生，可以使用qPCR仪器实时检测。
数据分析：荧光信号的大小可以用于计算目标 DNA 的浓度，通常使用阈值法或标准曲线法来计算。同时qPCR 技术广泛应用于生命科学研究和临床诊断等领域，如基因表达分析、病原体检测、单核苷酸多态性分析等。
qPCR应用范围： 比如临床疾病诊断：各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和疗效评价；地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测；肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断；遗传基因检测实现遗传病诊断。
动物疾病检测：
禽流感、新城疫、口蹄疫、猪瘟、沙门菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等、炭疽芽孢杆菌。
食品安全：
食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测。
科学研究：
医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究。
应用行业：
各级各类医疗机构、大学及研究所、CDC、检验检疫局、兽医站、食品企业及乳品厂等。
由于qPCR是实时定量检测致病病原体基因核酸，因此它比化学发光、时间分辨、蛋白芯片等免疫学方法更具独到优势。
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