1． 获取脑组织后，先仔细剥除脑膜和血管等纤维成分，置入 Hanks 液中漂洗 1 ～ 2 次后，置于 30 ～ 50 倍的 Hanks 液中，脑组织比较柔软，反复吹打即可制成细胞悬液。
2． 为排除脂肪成分和其它碎块，把悬液注入离心管中，在室温直立 5 ～ 10 分钟后，细胞或细胞团块自然下沉，脂肪等杂物易漂浮于悬液表层，吸除上清，如此反复二三次可获得较多的细胞成分。
3． 向末次沉淀物中加入适量营养液，通过纱网或纱布滤过，计数细胞并调整好细胞密度，接种入培养瓶或皿中，置 5 ％ CO2 温箱中培养。
4． 细胞生长汇合后，可用 0.25 ％胰蛋白酶消化法做传代处理，加消化液的量以能覆盖细胞层即可，待细胞开始从瓶壁脱离（平均 5 ～ 10 分钟），加入含有血清培养液，吹打制成细胞悬液。
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