外泌体是大多数细胞类型在体内和体外分泌的直径为 60 - 180 nm 的膜性囊泡,包含的 RNA 和蛋白质亚群因分泌细胞类型而异,因此在生物标志物发现和功能表征方面具有重要作用。外泌体作为纳米级载体,可将信号 RNA、脂质和蛋白质转运至其他细胞。研究外泌体内容物因而被称为获取生物标志物的 “液体活检”,有助于了解其在疾病发生发展中的作用。
外泌体与癌症
肿瘤分泌的外泌体含有完整且具有功能的 mRNA、小 RNA 和蛋白质,可改变细胞环境以促进肿瘤生长。肿瘤转移涉及操纵肿瘤微环境,以在局部和远处部位优化生存和生长条件。通过外泌体介导的细胞间通讯,为肿瘤细胞的远程植入准备好潜在位置,从而在实际转移发生前完成预处理。SBI 已从多种体外培养的人类癌症模型细胞系中纯化外泌体,以加速对其信号内容物的研究以及这些肿瘤外泌体的功能研究。
研究亮点:
* 高度纯化的外泌体标准品
* 用于蛋白质和 RNA 货物研究
* 来自多种模型细胞系的人类癌症外泌体
* 来自骨髓和前脂肪细胞的人类间充质干细胞外泌体
* 用于构建递送载体的小鼠树突状细胞外泌体
干细胞和树突状细胞外泌体:
间充质干细胞(MSCs)是再生医学的首选干细胞类型,其外泌体已被证明可促进组织损伤修复并减少炎症反应。人们对探索 MSC 外泌体货物以及改造它们以用于潜在治疗应用非常感兴趣。SBI 提供从人类骨髓和前脂肪细胞的 MSCs 中提取的高度纯化的外泌体,以推动相关研究发展。对于动物模型研究,还提供小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞系外泌体。这些外泌体在转染外源 RNA 后可被改造为体内递送载体,甚至可用于将一些药物递送至靶细胞。
·在外泌体缺失的FBS中生长的细胞系(Exo-FBS)
·使用ExoQuick-TC纯化外泌体
·具有NanoSight的尺寸和完整性
·CD63 Western blot分析验证
·外泌体提供:>1x10^6外泌体(50 ug蛋白)
细胞系及外泌体信息:
货号 | 描述 | 产品名称 | 规格 |
EXOP-100A-1 | MCF-7 Human breast cancer, noninvasive cell line: >1x10^6 frozen exosomes | MCF-7人乳腺癌,无创细胞系:bbb10 × 10^6冷冻外泌体 | 50ug |
EXOP-105A-1 | MDA-MB-231 Human breast cancer, aggressive/invasive/metastatic cell line: >1x10^6 frozen | MDA-MB-231人乳腺癌,侵袭性/侵袭性/转移性细胞系:>1x10^6冷冻 | 50ug |
EXOP-110A-1 | HEK293 Human embryonic kidney cell line: >1x10^6 frozen exosomes | HEK293人胚胎肾细胞系:bbb10 × 10^6冷冻外泌体 | 50ug |
EXOP-115A-1 | PC-3 Human prostate cancer cells derived from metastatic cancer cell line: >1x10^6 frozen exosomes | 从转移癌细胞系提取的PC-3人前列腺癌细胞:bbb10 × 10^6冷冻外泌体 | 50ug |
EXOP-120A-1 | A549 Human non-small cell lung cancer cell line: >1x10^6 frozen exosomes | A549人非小细胞肺癌细胞系:bbb10 × 10^6冷冻外泌体 | 50ug |
EXOP-125A-1 | H841 Human small cell lung cancer cell line: >1x10^6 frozen exosomes | H841人小细胞肺癌细胞系:bbb10 × 10^6冷冻外泌体 | 50ug |
EXOP-130A-1 | H196 Human small cell lung cancer cell line: >1x10^6 frozen exosomes | H196人小细胞肺癌细胞系:bbb10 × 10^6冷冻外泌体 | 50ug |
EXOP-135A-1 | DMS114 Human small cell lung cancer cell line: >1x10^6 frozen exosomes | DMS114人小细胞肺癌细胞系:bbb10 × 10^6冷冻外泌体 | 50ug |
EXOP-140A-1 | PCS-500-011 Human pre-adipose derived mesenchymal stem cell: >1x10^6 frozen exosomes | 人前脂肪来源的间充质干细胞:1x10^6冷冻外泌体 | 50ug |
EXOP-145A-1 | PCS-500-012 Human bone marrow-derived mesenchymal stem cell line: >1x10^6 frozen exosomes | PCS-500-012人骨髓间充质干细胞系:bbb10 × 10^6冷冻外泌体 | 50ug |
EXOP-200A-1 | JAWSII Mouse bone marrow immature dendritic cell line: >1x10^6 frozen exosomes | 小鼠骨髓未成熟树突状细胞系:bbb10 × 10^6冷冻外泌体 | 50ug |
EXOP-300A-1 | Human pooled serum: >1x10^6 frozen exosomes | 人混合血清:100 × 10^6个冷冻外泌体 | 50ug |
纯化外泌体的 CD63 验证
通过西方印迹法对纯化外泌体进行 CD63 验证。
从细胞系和人类血清中提取的纯化外泌体样本用 RIPA 缓冲液裂解,制备外泌体蛋白裂解液。每份样本取约 20 μg 蛋白质,通过梯度 SDS-PAGE 分离后转移到硝酸纤维素膜上。使用 SBI 的抗 CD63 抗体(货号 EXOAB-CD63A-1)以 1:1000 的稀释比例检测 CD63 表达。利用辣根过氧化物酶标记的二抗以 1:10000 的比例检测,并成像分析。所有纯化的外泌体样本均呈 CD63 阳性,表现出与已发表的外泌体 CD63 图谱相符的可变条带模式。
纯化外泌体的完整性
取约 5 uL 纯化外泌体样本,加入 995 μL 经 0.2 μm 过滤的 1×PBS(1:200 稀释)。将稀释后的样本置于设置为 33°C 的 VWR 500 型超声波水浴中孵育 10 分钟,以确保充分分散外泌体颗粒。然后将样本稀释 1:10 并以 2.5k 的速度涡旋 10 秒。最终 1:2000 稀释的样本用于每份样本分析,以收集 1000 - 3000 条颗粒轨迹。将样本注入 NanoSight LM10HSB,设置注射泵参数,将相机灵敏度设为自动 16(最灵敏的自动设置)。所有数据均重复三次采集。纯化的外泌体显示出预期的粒径分布特征,峰值直径在 90 - 110 nm 之间,浓度约为 1×10?? 个外泌体 / mL,符合培养基外泌体的预期范围。
纯化外泌体的纳米颗粒跟踪分析数据示例
对纯化外泌体进行 NanoSight NTA 样本数据分析,包括 MCF-7 外泌体、MDA-MB-231 外泌体、PC-3 外泌体、A549 外泌体、PCS-500-011 外泌体、HEK293 外泌体等样本。
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