1. 首先确定模板RNA完整性好，无DNA污染。2. RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。3. 为了防止模板降解，在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。4. 使用适量的模板RNA，模板量太多会降低特异性，太少会导致扩增不出条带或条带太弱。5. 若模板中有二级结构，可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。6. 设计引物时，避免在引物3’端含有互补序列，避免形成内部发卡结构。7. 可使用engreen的qPCR试剂，选用化学修饰的热启动酶，扩增效率和灵敏度更高
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