RNA pull-down实验原理介绍+实验步骤

具体步骤如下:

1. 在实验前制备好具有生物学意义的RNA分子,并根据需要对其进行修饰或标记。

2. 将RNA与DNA探针情况下进行热变性,然后快速冷却,以便DNA可以与RNA形成完整的双链结构,这个过程被称为RNA逆转录合成。

3. 将RNA-DNA卡特兰复合物添加到琼脂糖珠中,并通过旋转等手段使其定时摇动以保证孵育的均匀性。

4. 导入含RNA和蛋白质的细胞裂解液,将孵育液孵育24-72小时,使这些蛋白质与靶RNA结合。

5. 通过洗涤去除未结合的蛋白质,还原RNA-DNA复合物,从而使靶RNA单链从DNA探头上解离,这部分是拉下(pull-down)步骤。

6. 将洗涤过程中留下的蛋白质分离、纯化,并通过蛋白质分析技术进行分析。

总之,RNA pull-down实验是一种简单有效的技术,可用于确定RNA结合伴侣,发现潜在的RNA功能以及了解它们与蛋白质相互作用的方式。

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