人高转移潜能肝癌细胞MHCC-97H

细胞介绍

来源于中山医院，用人肝癌细胞株MHCC97-H接种裸鼠，进行3次肺转移筛选，取肺转移瘤建成皮下接种后高度自发性肺转移的肝癌细胞系

细胞特性

12） 1）来源：肝癌

2）形态：上皮细胞样

3）含量：＞1x106个／ml

4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

S）规格：T25瓶或者1ml冻存管包装

运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏：（2）存活细

胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供科研使用。细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备DM EM培养基｛DMEM / F-1 2,GIBCO，货号12400024，添加NaHC0 3 2.0g/L),

85%：马血清，10%；胎牛血清，5%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%完全培养基，10 %DM SO，现用现配。液氮储存。

二．细胞处理：

1 复苏细胞：将含有1ml细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4ml培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜〉。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镇离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量膜酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走，〉加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。