染色体的结构显示和检测在遗传学研究中具有重要意义，以下详细介绍几种常见的染色体检测技术及操作流程。
一、染色体显带
显Q带法
- 漂洗：选取经过干热预处理或已老化的染色体标本，放入pH6.0缓冲液中浸泡5 - 10分钟。
- 染色：将标本浸入pH6.0的GM或QD染液中5 - 10分钟。
- 再次漂洗：把标本浸入新鲜的pH6.0缓冲液中漂洗两次，每次5分钟。
- 观察：在标本染色体面滴1 - 2滴新鲜缓冲液，盖上盖片（注意避免产生气泡），然后置于荧光显微镜下观察。
显G带法
胰酶 - Giemsa混合显带法
- 预处理：取中期染色体标本，先在60℃温箱中放置20 - 30分钟，或者在37℃温箱中过夜，之后浸入0.025M、pH6.8的磷酸缓冲液中，在56℃下温浴10分钟。
- 消化和染色：使用现配制的胰蛋白酶 - Giemsa混合液进行消化和染色，时间为10 - 30分钟。混合液的配制比例为：0.025M、pH6.8的磷酸缓冲液73.0ml，甲醇27.0ml，Giemsa干粉50.0mg，0.25%胰酶0.3 - 0.4ml。
- 封片：染色后先用自来水冲洗，再放入蒸馏水漂洗数次，晾干后用二甲苯透明2 - 3分钟，最后封入中性树脂中。
Giemsa显带法
- 预处理：将标本放入60 - 80℃温箱或烤箱中20 - 30分钟，也可在37℃温箱中过夜。
- 胰酶消化：用0.85%的NaCl配制0.25%胰蛋白酶溶液，对标本进行消化3 - 5分钟。
- 染色：取出标本片，直立于吸水纸上除去多余胰酶液后，立即放入Giemsa染液中染色10分钟。
- 封片：用自来水冲洗，蒸馏水漂洗，晾干后用二甲苯透明2 - 3分钟，封入中性树胶中。
二、姐妹染色单体分化染色
BUdR掺入和制片程序
- BUdR培养液制备：制备含BUdR的培养液，最终浓度为3 - 10微克/毫升。
- BUdR掺入：对于传代细胞，在末次传代后改用含BUdR的培养液培养；对于人末梢血细胞，一开始就用含BUdR培养液培养，培养瓶需放在特制黑色木盒、黑布中或用黑纸包裹，在37℃温箱内培养。
- 中止掺入与制片：待细胞经历两个细胞周期（人周围血细胞培养48或72小时）后，加秋水仙素并进行制片。
染色方法
方法一
- 老化：将中期染色体标本老化1 - 2天。
- 预处理：把标本放入预热至85 - 89℃的1M NaH₂PO₄中处理15分钟。
- 制片：用温蒸馏水轻轻漂洗，再用蒸馏水冲洗，晾干后用Giemsa液染色10分钟，再次晾干，用二甲苯透明后封固。
方法二（FPG法）
- 标本准备：使用掺入BUdR后的中期染色体标本。
- 荧光染色：用荧光染料Hoechst 33258（用pH7.0 Sorensen缓冲液配制，浓度为0.5微克/毫升）染色12 - 15分钟。
- 黑光灯照射：用自来水冲洗后，加1滴pH8.0缓冲液，盖上盖片，用20W黑光灯照射，灯距5厘米，照射半小时。
- 温浴：在50 - 60℃热的2×SSC液中温育2小时，用蒸馏水冲洗后晾干。
- 染色：用pH6.8的2%Giemsa染色15分钟，透明封固。
方法三
- 标本处理：将掺入BUdR后的中期染色体标本放在30瓦日光灯下，灯距3厘米，照射6小时。
- 温浴：用60℃的2×SSC液处理15分钟。
- 染色：用Giemsa染色10分钟，可获得满意的标本。
三、染色体脆性位点的检测
为提高染色体脆性位点的检出率，可采取以下措施：
- 培养时将血清量降至5%。
- 使用不含叶酸的MEM - Fra培养基进行培养。
- 将培养环境的pH调至7.5。
四、微核检测
方法一
- 采血：静脉采血0.5ml，用肝素抗凝，放入小方瓶中，加入5ml培养液（含20%小牛血清的Eagle液，加PHA 40微克/毫升）。
- 培养：将培养瓶置于37℃温箱内培养48或72小时，然后以1000rpm离心8分钟。
- 固定：用3：1的甲醇/冰醋酸固定3次，每次15分钟，离心沉淀固定液。
- 制片：采用冷冻载片滴片法制片，自然干燥后用10%Giemsa（pH6.8）染色15分钟。
方法二
- 采血：取肝素抗凝血0.5 - 0.6ml，放入10ml试管中，加入血量一半的0.5%甲基纤维素，充分混合。
- 培养：将试管置于37℃温箱中静置培养30分钟，以2000rpm离心10分钟，去除上清液。
- 制片：制作涂片，用Wright法染色。
方法三
- 采血：用三棱针刺无名指取血0.6ml，立即注入内径3mm、长5cm的血液沉淀管中，用小玻璃棒搅拌除去纤维蛋白。
- 加明胶：加入3%的明胶，小心混匀，置于37℃温箱中自然沉降50分钟。
- 制片：吸去上清液，离心后将沉淀物涂片，自然干燥，先用Wright染色30分钟，再用Giemsa染色2分钟。
五、非程序DNA合成检测（UDS）
放射自显影UDS的测定
- 细胞培养：采用WI - 38成纤维细胞，使用完全培养液支持物盖片培养法培养，直至细胞生长至汇合。
- 抑制DNA合成：弃去旧培养液，加入不含精氨酸的EMEM培养液，继续培养20 - 24小时。
- 加测试物：加入10mM羟基脲（阳性对照加MNNG），培养2小时。
- H - TdR处理：每皿内加入3H - TdR后，培养20 - 24小时。
- 漂洗：去除培养液，用不含钙、镁的BSS漂洗。
- 制片：按照制备放射自显影标本的方法固定细胞、涂胶、曝光、显影及染色。
- 观察：在油镜下计数，排除S期半保留复制细胞（即被银粒覆盖的细胞核），只计数核上的银粒数目，再扣除本底，结果以银粒数/核的均值或含10个银粒左右细胞的百分率表示。
液闪计数法
- 细胞培养和处理：将人二倍体成纤维细胞接种在培养皿中培养。
- 试剂添加处理：加入培养液、MNNG、羟基脲以及3H - TdR处理，步骤与放射自显影UDS测定的前5项相同，自漂洗步骤后继续操作。
- 消化：用0.25%胰蛋白酶消化细胞，制成悬液。
- 液闪计数标本制备：用10%三氯醋酸处理，将细胞收集在玻璃纤维滤纸片上，用无水乙醇脱水烤干，放入液闪杯中，加入闪烁液，置于液闪计数仪上计数。结果以dpm/10⁶细胞或cpm/每皿细胞表示
