一、QPCR原理
QPCR，即实时荧光定量PCR，是一种在DNA扩增过程中通过荧光信号进行实时监测的技术。其原理基于DNA双链复制过程中，每复制一次，就会有一个荧光分子被标记到新生成的DNA链上，通过检测荧光信号的累积，可以实时监测DNA的扩增过程。
二、QPCR的主要步骤
①样品制备：此步骤是进行QPCR实验的第一步，包括从生物样本中提取出DNA或RNA，并将其转化为适合PCR扩增的形式。这个过程通常包括细胞裂解、核酸提取和纯化等步骤。
②PCR扩增：在完成样品制备后，将DNA或RNA模板与引物和dNTPs混合，并在特定温度下进行扩增。在这个过程中，引物与模板DNA特异性结合，并在DNA聚合酶的作用下延伸，生成新的DNA链。这个过程会重复多次（通常是30-40次），以获得足够的DNA供后续分析。
③荧光检测：在PCR扩增过程中，每次DNA合成会产生一个荧光分子，这些荧光分子会被检测系统捕获并转化为电信号。这个电信号随后被转化为可以测量的数据，如CT值（阈值循环数）。通过比较不同样品在相同循环数下的荧光强度，可以确定样品中目标分子的相对数量。
通过以上三个步骤，qPCR技术能够在短时间内实现目标分子的高灵敏度、高特异性和实时监测。这种技术广泛应用于基因表达分析、突变检测、病原体定量以及基因组学和表观遗传学研究中。
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