QPCR荧光定量基因表达量太低跑不出来怎么办?

QPCR实验中基因的表达里我们一般关注CT值的大小,CT值越高,表达量越低。

当CT值超过35时,证明基因表达里太低或几乎没有,我们可认为无意义。

CT值低的原因一般包括模板浓度低或存在PCR抑制物和扩增效率低两个,解决方法如下:

1、提高模板浓度;或提高RNA或cDNA稀释比例;或重新制备模板。

2、降低退火温度,或选用二步法扩增;组分和体系充分混匀;优化反应程序;或尝试更换试剂。

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