一、实验目的
通过QPCR实验技术定量检测基因表达量。
二、实验样品及分组1.实验样本
备注：包括干预细胞用的相关试剂均按实验样品登记，每行登记一个或一组独立样品。2.实验分组
细胞： 293T
分组：OE-NC、OE-lnc BDNF-AS
指标： lncRNA BDNF-AS（NR_002832.2）
三、实验结果
四、实验材料1.主要实验仪器
2主要实验试剂及耗材
五、实验原理
QPCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。根据荧光信号的变化能够实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析就能对起始模板进行定量分析。
六、实验步骤
1.引物设计
2.样品前期处理
向细胞样本中加入500 μl Trizol。3.RNA提取
(1)向加有Trizol的1.5 ml EP管中加入100 μl氯仿，震荡混匀后，静置5 min，在12000 rpm，4度离心10 min。
(2)从离心机中取出1.5 ml EP管，再将上层无色透明的水相层吸入到另一干净的1.5 mlEP管中。（样品会分为三层：下层有机相层，中间层和上层的水相层，RNA位于上层水相中。）加入等体积的异丙醇，上下轻轻颠倒混匀之后，静置10 min，再12000 rpm，4度离心10 min。
(3)离心之后可在EP管壁或管底看到胶状沉淀出现，沉淀就是要提取的RNA。小心弃去上清，不要将沉淀倒掉了。
(4)用1 ml 75℅乙醇对RNA沉淀进行洗涤。然后于4℃ 7000 rpm离心5分钟，将上清尽量去除干净。
(5)室温静置干燥，大约干燥5～10分钟即可。（不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低）。所有EP管中加入25 μl的DEPC H2O，用枪头吹打几次，使RNA充分溶解，-80℃保存。
(6)RNA浓度检测：使用核酸蛋白检测仪检测RNA浓度。
4.逆转录PCR
1.按以下组份分别配制逆转录反应液
2.cDNA立刻进行实验或者置于4℃保存。
5.RNA浓度及纯度测定：
（见实验结果部分）七、实时荧光定量PCR反应1.反应体系的配置
2..反应条件设置：扩增程序：
熔解程序：
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