PI染色法(活细胞染色)检测细胞凋亡

染料及试剂

1. 含0.1%TritonX-100的PBS缓冲液(pH7.4)

2. PI染液:将PI(碘化丙啶)溶于含0.1%TritionX-100的PBS中,终浓度为50μg/ml,含RNase 100μg/ml,避光保存。

3. 荧光显微镜

操作方法

制备凋亡细胞悬液,浓度为106 /ml;

取1ml的细胞悬液,加10μl的PI染液混合,作用10min;

加入5ml PBS,1500r/min离心5min,弃上清,重复洗涤2次;

重悬细胞,滴片并用盖玻片封片;

结果判断

在荧光显微镜下选用大于536nm的激发光观察:正常活细胞胞核被PI着染呈红色;早期凋亡细胞胞核浓缩,染色加深,或核染色质聚集于核膜一边,呈新月状;晚期凋亡细胞胞核碎裂成大小不等的原形小体,并被细胞膜所包绕,即凋亡小体。

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