一、实验步骤
1. 在无菌的0.5ml或0.2ml离心管中按下列操作程序加样：
| 反应物 | 体积（μl） | 终浓度 |
| 去离子水 | 29.4 | |
| 10×Buffer B | 5 | 1× |
| 4×dNTP混合物 | 5 | 各200μmol/L |
| MgCl2 | 3 | 1.5mmol/L |
| 有义引物 | 2.6 | 0.25μmol/L |
| 反义引物 | 2.6 | 0.25μmol/L |
| 模板 | 2 | 0.1μg |
| TaqDNA聚合酶 | 0.4 | 1unit |
2. 用微量可调加样器和一次性Tip向每一管中加50μl矿物油。每加一管换一次Tip。
3. 振荡每只管，然后短暂离心。
4. 将管放到预热的热循环中，按下列程序开始循环：
5. 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，分析结果。电泳条件：60-80V，15-20分钟。
6. 紫外分析仪检查电泳结果。
二、讨论
1. 假阴性，不出现扩增条带
PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量，④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。
模板：①模板中含有Taq酶抑制剂，②在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。③模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，有可能是模板核酸提取过程出了毛病，可使用阳性对照的DNA模板配合检查模板质量。
内容来源：生物资料网，如果侵权麻烦联系网站工作人员删除！
