PCR技术的发明
1983 Kary Mullis 发明
1985 开始有文章发表
1993 获诺贝尔奖
广泛用于分子生物学研究领域
变性--退火--延伸三个步骤
1、模板DNA的变性：93℃-95℃左右
2、模板DNA与引物的退火(复性)：Ta=Tm-3~5 ℃
3、引物的延伸：Taq DNA聚合酶之5’-3’DNA聚合酶活性
PCR标准反应体系
DNA模板 p引物 p反应缓冲液 pMg 2＋ pdNTP p耐热聚合酶 pddH2O
反应体系对PCR扩增的影响
1、DNA模板:
纯度 蛋白、多糖、酚类等抑制PCR反应 完整性 模板降解会导致PCR扩增无产物 浓度 浓度适当
2、引物
设计 长度适当、避免二级结构和二聚体 合成质量 浓度 50uL体系引物加量为10-20 pmol
3、反应Buffer
pH、盐离子、稳定剂、增强剂 提供缓冲环境
4、Mg 2＋浓度
过高非特异性严重 过低无扩增产物
5、dNTP Mixture
浓度适当，避免反复冻融
6、ddH2O
pH值适当，避免污染
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